產品簡介

InSphero Akura 96/384孔超(chao)低(di)吸附細(xi)胞(bao)(bao)(bao)微(wei)孔板是(shi)一種(zhong)簡單(dan)、靈活且(qie)能兼容(rong)高(gao)通(tong)量和(he)自(zi)動化系統的(de)(de)操(cao)作平臺，用于(yu)無(wu)支(zhi)架的(de)(de)3D細(xi)胞(bao)(bao)(bao)培養、觀(guan)察和(he)觀(guan)測。每塊InSphero Akura 96/384孔超(chao)低(di)吸附細(xi)胞(bao)(bao)(bao)微(wei)孔板都(dou)是(shi)由(you)超(chao)低(di)吸附的(de)(de)培養孔和(he)用于(yu)減少培養基蒸發的(de)(de)板蓋(gai)組成。適用于(yu)永生或(huo)改良細(xi)胞(bao)(bao)(bao)系、原代(dai)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)以及(ji)誘(you)導(dao)性多能干細(xi)胞(bao)(bao)(bao)（iPS cells）等(deng)已知可以用于(yu)3D細(xi)胞(bao)(bao)(bao)培養的(de)(de)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)類型(xing)形成類器(qi)官、細(xi)胞(bao)(bao)(bao)微(wei)球體或(huo)細(xi)胞(bao)(bao)(bao)微(wei)組織。

產品特色

InSphero Akura 96/384孔(kong)超(chao)低吸附細(xi)(xi)胞微孔(kong)板(ban)的(de)獨(du)特設計可(ke)以幫助客戶更好地(di)開展(zhan)高通量的(de)體外(wai)3D細(xi)(xi)胞培養實驗。從(cong)遠處看，InSphero Akura 96/384孔(kong)細(xi)(xi)胞微孔(kong)板(ban)和普通的(de)細(xi)(xi)胞微孔(kong)板(ban)的(de)外(wai)觀沒有明顯不同(tong)，尺寸符(fu)合SLAS/ANSI標準，可(ke)以完美兼(jian)容常規的(de)實驗操作(zuo)以及儀器。

從近處觀察，便可以發現其創新型設計的微妙之處：微孔板中的每個孔都擁有類似“倒置煙囪”的形狀以及一個被稱為“SureXchange ledge”的吸頭停靠處以便于更換培養基。InSphero Akura 96孔細胞微孔板的吸頭停靠處呈軸對稱，而InSphero Akura 384孔細胞微孔板只有單側的吸頭停靠處。在更換培養基時，只需要將吸頭的尖部停靠在這里，便能得到一個合適的觸覺反饋，避免將吸頭伸入過深的位置而對培養的細胞微球產生影響。微孔板的培養孔壁有一層耐用的涂層，可以有效防止細胞微球體在培養的過程中發生附著。

InSphero Akura 384孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)細(xi)胞(bao)微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)由24列(lie)、16行(xing)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)構成，列(lie)由數字1-24表示，行(xing)由字母A-P標識(shi)，孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)A1標識(shi)整(zheng)(zheng)板(ban)(ban)左上角的(de)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)，而(er)P1標識(shi)整(zheng)(zheng)板(ban)(ban)左下(xia)角的(de)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)，由A1和P1孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)可以確定整(zheng)(zheng)塊微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)的(de)方向（圖2）。InSphero Akura 384孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)細(xi)胞(bao)微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)的(de)培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)結構是(shi)非對稱的(de)，吸頭(tou)停靠處位(wei)于培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)靠近微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)上側的(de)位(wei)置，而(er)供(gong)細(xi)胞(bao)微(wei)球體生(sheng)長的(de)空(kong)穴位(wei)于培(pei)(pei)(pei)養(yang)(yang)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)靠近微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)下(xia)側的(de)位(wei)置。在使用InSphero Akura 384孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)細(xi)胞(bao)微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)時(shi)應特別注意微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板(ban)(ban)的(de)方向，避免不正當的(de)操作對實驗結果產生(sheng)影響。

產品優勢

1. 利用(yong)超低吸附(fu)的(de)微孔板中便捷地獲得細胞(bao)自(zi)聚集(ji)形(xing)成(cheng)的(de)細胞(bao)微球

2. 獨特(te)的(de)培養(yang)孔設計使得更(geng)換培養(yang)基(ji)的(de)過(guo)程(cheng)更(geng)加輕松，可以(yi)有效避免細胞長(chang)期培養(yang)時因為更(geng)換培養(yang)基(ji)導致的(de)細胞微球的(de)丟失或損(sun)傷

3. 培養孔的(de)底部設有直徑為1mm的(de)平底觀(guan)察(cha)窗，可以(yi)方便(bian)地(di)進(jin)行細胞(bao)微球(qiu)的(de)定(ding)位和觀(guan)察(cha)，避免了一般圓(yuan)底ULA板成像時的(de)局(ju)部變形

4. InSphero Akura 384孔細胞微孔板可以(yi)與更先進的成(cheng)像和自動化液體處理系統兼容以(yi)開展高通(tong)量實驗(yan)，培(pei)養孔獨特的黑(hei)色壁體可以(yi)有效消除孔間的熒光串擾

自備(bei)材料

1. 實驗(yan)細胞與合適的培養基(ji)

2. 倒置顯微鏡

3. 細胞計數工具

4. 移液器(qi)/自動化液體處理系統

5. 板孔離心(xin)機(ji)

6. 二氧化碳培養箱（設(she)置為5%濃(nong)度(du)(du)二氧化碳，95%相對(dui)濕度(du)(du)，37攝氏度(du)(du)）

實驗前準(zhun)備

1. 培養基于37攝氏度預熱

2. 用70%乙(yi)醇擦拭微孔板的(de)外包裝(zhuang)

3. 在無菌操作環(huan)境下(xia)小心地(di)打開微孔板的外包(bao)裝

實驗步驟

預濕潤(run)

* 推(tui)薦(jian)在(zai)無菌操(cao)作環境下執行(xing)預(yu)潤濕的操(cao)作，可以(yi)有效防止培養(yang)孔中的氣泡產生。

1. 向孔(kong)(kong)內加入(ru)40uL含有FCS或BSA的(de)培養(yang)(yang)基，加入(ru)時注意使移液器(qi)的(de)吸(xi)頭(tou)盡量靠近(jin)培養(yang)(yang)孔(kong)(kong)的(de)底(di)部(bu)，但(dan)是(shi)注意不(bu)要觸碰到培養(yang)(yang)孔(kong)(kong)的(de)底(di)部(bu)（對于InSphero Akura 96孔(kong)(kong)細(xi)胞(bao)微孔(kong)(kong)板，推薦(jian)使用(yong)8/12通道(dao)移液器(qi)以縮短操作時間）。

2. 使用移液器吹洗培養基以濕潤(run)培養孔，此步驟應小心(xin)操作避(bi)免(mian)產生(sheng)氣泡。

3. 將吸頭停(ting)靠(kao)在培(pei)養(yang)(yang)孔內(nei)的(de)吸頭停(ting)靠(kao)處（此處非常重要，請仔細參考前文的(de)“產(chan)品特色”部分，不正確的(de)操作(zuo)可能(neng)會(hui)損壞微(wei)孔板(ban)并影(ying)響其性能(neng)），將孔內(nei)的(de)所有培(pei)養(yang)(yang)基(ji)吸出（根(gen)據微(wei)孔板(ban)的(de)設計，InSphero Akura 96孔細胞微(wei)孔板(ban)將殘留(liu)少(shao)于5-7uL的(de)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)，InSphero Akura 384孔細胞微(wei)孔板(ban)將殘留(liu)少(shao)于2-3uL的(de)培(pei)養(yang)(yang)基(ji)，可以(yi)忽略不記(ji)）。

細胞接種

1. 依(yi)據實驗設計，將(jiang)要接種的細(xi)胞(bao)或細(xi)胞(bao)混(hun)合物制(zhi)備成單(dan)細(xi)胞(bao)懸液。

2. 使用血(xue)球計(ji)數(shu)(shu)板或其他合(he)適的細(xi)(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)(shu)工具進行細(xi)(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)(shu)，并確定合(he)適的細(xi)(xi)胞(bao)接種(zhong)密度。

3. 使(shi)用移液器(qi)充分(fen)吹洗細胞(bao)懸液，確保懸液中的細胞(bao)均勻分(fen)布，并取合適數量的細胞(bao)，用培(pei)養(yang)基(ji)將(jiang)體積(ji)補足(zu)70uL（InSphero Akura 96孔(kong)(kong)細胞(bao)微孔(kong)(kong)板(ban)）/50uL（InSphero Akura 384孔(kong)(kong)細胞(bao)微孔(kong)(kong)板(ban)）。

* 推薦的(de)細胞(bao)(bao)接種密度：用于(yu)增殖細胞(bao)(bao)的(de)長期培養(yang)(yang)，建議使用較低(di)的(de)起(qi)始密度，建議每孔接種250-500細胞(bao)(bao)；用于(yu)非(fei)增殖細胞(bao)(bao)的(de)培養(yang)(yang)或(huo)需(xu)要快速(su)獲得較大體積的(de)細胞(bao)(bao)微球體，建議每孔接種2500-25000細胞(bao)(bao)。

4. 緩慢地將細(xi)胞液(ye)接入微(wei)孔(kong)板上對應的培養孔(kong)中，該過(guo)程(cheng)應盡量保持輕柔（移(yi)液(ye)速度小(xiao)于10uL/sec），并盡量避(bi)免吸(xi)頭觸碰培養孔(kong)的底部。

細(xi)胞沉降和細(xi)胞微球體形成

* 為(wei)了達到更(geng)佳的(de)(de)實驗效(xiao)果，可能需要優化細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)的(de)(de)條件，例如(ru)：調整(zheng)細(xi)(xi)胞接種(zhong)密度或培(pei)養(yang)(yang)基成分，或通過添加支持細(xi)(xi)胞（supporting cells，如(ru)基質分泌細(xi)(xi)胞）或添加劑（如(ru)ECM），對于初(chu)次(ci)開(kai)展3D培(pei)養(yang)(yang)的(de)(de)細(xi)(xi)胞類型，建議(yi)嘗(chang)試多種(zhong)的(de)(de)細(xi)(xi)胞培(pei)養(yang)(yang)條件。

1. 將InSphero Akura 96/384孔(kong)細(xi)胞微孔(kong)板蓋好蓋子并放入(ru)板孔(kong)離(li)心機中，250 x g（RCF）離(li)心2min。

* 該離心(xin)步(bu)(bu)驟(zou)是選做步(bu)(bu)驟(zou)，不過短暫的(de)離心(xin)可(ke)以幫(bang)助(zhu)去除培(pei)養孔內的(de)殘(can)留氣(qi)泡并幫(bang)助(zhu)細胞沉(chen)降至培(pei)養孔的(de)底部(bu)以促進細胞微球體的(de)生成。

2. 將InSphero Akura 96/384孔細(xi)胞微(wei)(wei)孔板移入二氧(yang)化(hua)碳培養(yang)箱中，并將InSphero Akura 96/384孔細(xi)胞微(wei)(wei)孔板傾(qing)斜30°放置或使用InSphero Akura傾(qing)斜支(zhi)架（CS-10-002-00），以促進(jin)細(xi)胞微(wei)(wei)球體的形成(cheng)。

3. 在(zai)適宜的條(tiao)件(jian)下培(pei)養2-5天，每天觀察(cha)細(xi)胞微(wei)球(qiu)體的形態，并在(zai)需要時(shi)更(geng)換培(pei)養基。

培養基更換

* 通(tong)常情況下，細胞微球體(ti)的培(pei)養(yang)每周(zhou)需要更(geng)換2-3次培(pei)養(yang)基，具體(ti)更(geng)換頻率依(yi)據實際(ji)情況而定

1. 將InSphero Akura 96/384孔(kong)細(xi)胞(bao)微(wei)孔(kong)板從(cong)二(er)氧化(hua)碳(tan)培(pei)養箱中取出(chu)，并以合適的方向擺放(fang)（尤其是對于InSphero Akura 384孔(kong)細(xi)胞(bao)微(wei)孔(kong)板）。

2. 將移(yi)液(ye)器的(de)吸(xi)頭(tou)沿著孔(kong)壁(bi)慢(man)慢(man)下滑直至感受到(dao)吸(xi)頭(tou)停靠處(chu)帶來的(de)觸覺反饋，并(bing)將培(pei)養孔(kong)內的(de)培(pei)養基(ji)完全吸(xi)出（除了培(pei)養孔(kong)深處(chu)殘留的(de)微量培(pei)養基(ji)），此步驟應盡量輕緩(huan)，建(jian)議的(de)移(yi)液(ye)速(su)度(du)小于10-20uL/sec。

3. 將(jiang)移(yi)液(ye)器的(de)吸頭沿著孔壁(bi)慢慢下滑直(zhi)至感受到吸頭停靠處帶(dai)來的(de)觸覺反饋，并加(jia)入70uL（InSphero Akura 96孔細(xi)胞(bao)微孔板）/50uL（InSphero Akura 384孔細(xi)胞(bao)微孔板）預熱的(de)新培養基，此步驟應盡量輕緩，建議的(de)移(yi)液(ye)速度(du)小于(yu)10-20uL/sec（對(dui)于(yu)InSphero Akura 96孔細(xi)胞(bao)微孔板，移(yi)液(ye)速度(du)可(ke)以適當放寬至小于(yu)50uL/sec）。

4. 如果要求(qiu)更加徹底的培養基(ji)更換，可以重復第3-4步。

5. 將InSphero Akura 96/384孔細胞微孔板(ban)放(fang)回二氧化碳培(pei)養箱中繼續培(pei)養。

* 如需(xu)要了解更多(duo)操(cao)作細節或使用自(zi)動(dong)化液體處理系(xi)統，請聯系(xi)曼(man)博生物(wu)技術支持。

細胞微(wei)球體收取(qu)或轉移-InSphero Akura 96孔細胞微(wei)孔板(ban)

1. 在收取細胞(bao)微(wei)球(qiu)體(ti)之前，使(shi)用至少60uL的100% FCS預(yu)濕潤吸(xi)頭，該步(bu)驟可以(yi)有效防(fang)止細胞(bao)微(wei)球(qiu)體(ti)黏附在吸(xi)頭內側(ce)。

2. 方案一：使用1000uL的(de)(de)移液器和吸(xi)頭，沿著培(pei)養孔側壁(bi)緩緩往下移動直到感受到觸覺反饋，此時吸(xi)頭的(de)(de)尖部正好位于(yu)細胞微球體的(de)(de)上(shang)側，可(ke)以(yi)直接吸(xi)取細胞微球體。

* 1000uL的吸頭尖部(bu)直徑略微大于培養孔的底部直徑，所以可以避免在吸取細胞微球體時對其造成擠壓。

3. 方案二：使用100-200uL的(de)(de)移液器和(he)吸(xi)頭，小心保持一個較小的(de)(de)角度并(bing)沿著培(pei)養(yang)孔(kong)側(ce)壁(bi)緩緩往下移直(zhi)至觸碰(peng)到(dao)培(pei)養(yang)孔(kong)底部，吸(xi)取細胞微球體(ti)。

* 100-200uL的吸頭尖部小于培養孔的底部直徑，如果不能保持一個較小的傾斜角度可能會導致吸取過程中細胞微球體的擠壓受損。

4. 將細(xi)胞微球體轉移至合適(shi)的容器中(zhong)。

細胞(bao)微(wei)球體收取或轉移-InSphero Akura 384孔(kong)細胞(bao)微(wei)孔(kong)板

1. 在收取細胞微(wei)球體之前，使用至少50uL的(de)100% FCS預濕潤吸(xi)頭，該步驟可以有(you)效防止細胞微(wei)球體黏(nian)附在吸(xi)頭內側。

2. 單個細胞微球體的收取：使用1000uL的移液器和加長的吸頭（如1250uL吸頭），沿著培養孔側壁（靠近板孔下側的一側，即吸頭停靠處的對側）緩緩往下移動直到感受到觸覺反饋，此時吸頭的尖(jian)部正好位于細胞微球體的上側，可以直接吸取細胞微球體。

3. 連(lian)(lian)續細胞(bao)微(wei)球(qiu)體(ti)的(de)吸(xi)取(qu)：InSphero Akura 384孔細胞(bao)微(wei)孔板(ban)可以(yi)支(zhi)持(chi)連(lian)(lian)續的(de)吸(xi)取(qu)。如需要(yao)進行連(lian)(lian)續細胞(bao)微(wei)球(qiu)體(ti)的(de)吸(xi)取(qu)，在實驗開始前需要(yao)使用130uL的(de)100% FCS預濕潤吸(xi)頭。詳(xiang)細的(de)操作(zuo)細節(jie)，請聯(lian)系曼博生物(wu)技(ji)術(shu)支(zhi)持(chi)。