產品簡介

InSphero Akura 96/384孔(kong)超(chao)低(di)吸附(fu)(fu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)微(wei)(wei)孔(kong)板(ban)(ban)是(shi)(shi)一種(zhong)簡單、靈活且能兼容高通(tong)量和自動(dong)化系統的(de)(de)(de)操作平臺，用(yong)(yong)于(yu)無支架的(de)(de)(de)3D細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)(yang)、觀察(cha)和觀測。每(mei)塊InSphero Akura 96/384孔(kong)超(chao)低(di)吸附(fu)(fu)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)微(wei)(wei)孔(kong)板(ban)(ban)都是(shi)(shi)由超(chao)低(di)吸附(fu)(fu)的(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)孔(kong)和用(yong)(yong)于(yu)減少(shao)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基蒸發的(de)(de)(de)板(ban)(ban)蓋組成。適用(yong)(yong)于(yu)永(yong)生或改良細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)系、原代細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)以及誘導性多能干細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)（iPS cells）等已知可以用(yong)(yong)于(yu)3D細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)培(pei)(pei)養(yang)(yang)的(de)(de)(de)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)類型(xing)形成類器官、細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)微(wei)(wei)球體或細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)微(wei)(wei)組織。此外，InSphero Akura 384孔(kong)細(xi)(xi)(xi)(xi)胞(bao)微(wei)(wei)孔(kong)板(ban)(ban)的(de)(de)(de)底部是(shi)(shi)一層透氣(qi)膜，可以保證長時(shi)間培(pei)(pei)養(yang)(yang)時(shi)充足(zu)的(de)(de)(de)氣(qi)體交換(huan)。

產品特(te)色

InSphero Akura 96/384孔(kong)超低吸(xi)附細(xi)(xi)胞(bao)微孔(kong)板的(de)獨特設計可(ke)以幫助客戶(hu)更好地開(kai)展高通量的(de)體外3D細(xi)(xi)胞(bao)培養(yang)實驗(yan)。從遠處看，InSphero Akura 96/384孔(kong)細(xi)(xi)胞(bao)微孔(kong)板和普通的(de)細(xi)(xi)胞(bao)微孔(kong)板的(de)外觀沒有明(ming)顯(xian)不同，尺寸符(fu)合SLAS/ANSI標準，可(ke)以完美兼容常規的(de)實驗(yan)操作以及儀器。

從近處觀察，便(bian)可以(yi)(yi)發現其創新型設計的(de)微妙之處：微孔(kong)板(ban)(ban)中(zhong)的(de)每個孔(kong)都擁有類似“倒置煙(yan)囪”的(de)形狀以(yi)(yi)及一(yi)(yi)個被稱(cheng)(cheng)為“SureXchange ledge”的(de)吸(xi)頭停靠處以(yi)(yi)便(bian)于更(geng)換培(pei)(pei)養基。InSphero Akura 96孔(kong)細(xi)胞(bao)微孔(kong)板(ban)(ban)的(de)吸(xi)頭停靠處呈(cheng)軸對稱(cheng)(cheng)，而InSphero Akura 384孔(kong)細(xi)胞(bao)微孔(kong)板(ban)(ban)只有單側的(de)吸(xi)頭停靠處。在更(geng)換培(pei)(pei)養基時，只需要將吸(xi)頭的(de)尖部停靠在這里，便(bian)能得到一(yi)(yi)個合適的(de)觸覺反饋，避免將吸(xi)頭伸入過深的(de)位置而對培(pei)(pei)養的(de)細(xi)胞(bao)微球產生影響。微孔(kong)板(ban)(ban)的(de)培(pei)(pei)養孔(kong)壁有一(yi)(yi)層耐用的(de)涂層，可以(yi)(yi)有效防止細(xi)胞(bao)微球體在培(pei)(pei)養的(de)過程中(zhong)發生附(fu)著。

InSphero Akura 384孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)細(xi)(xi)胞(bao)微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板由(you)24列、16行培(pei)養孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)構(gou)成，列由(you)數(shu)字(zi)1-24表示，行由(you)字(zi)母A-P標識(shi)，孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)A1標識(shi)整(zheng)板左上(shang)(shang)角的(de)(de)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)，而P1標識(shi)整(zheng)板左下角的(de)(de)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)，由(you)A1和(he)P1孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)可以確定整(zheng)塊微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板的(de)(de)方向（圖2）。InSphero Akura 384孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)細(xi)(xi)胞(bao)微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板的(de)(de)培(pei)養孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)結構(gou)是非對(dui)稱的(de)(de)，吸頭停靠處位(wei)于培(pei)養孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)靠近微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板上(shang)(shang)側的(de)(de)位(wei)置，而供細(xi)(xi)胞(bao)微(wei)球體生(sheng)長的(de)(de)空穴位(wei)于培(pei)養孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)靠近微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板下側的(de)(de)位(wei)置。在使(shi)用(yong)InSphero Akura 384孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)細(xi)(xi)胞(bao)微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板時應特別注(zhu)意微(wei)孔(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)(kong)板的(de)(de)方向，避免不正當的(de)(de)操作(zuo)對(dui)實(shi)驗(yan)結果產(chan)生(sheng)影響。

產品優勢

1. 利用超(chao)低吸(xi)附的微孔板中便(bian)捷地(di)獲得(de)細胞(bao)自聚集形成的細胞(bao)微球

2. 獨特的(de)(de)(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)孔(kong)設(she)計使得更換培(pei)(pei)養(yang)(yang)基的(de)(de)(de)過(guo)程更加輕(qing)松(song)，可以有效避免(mian)細胞長期(qi)培(pei)(pei)養(yang)(yang)時因為(wei)更換培(pei)(pei)養(yang)(yang)基導致的(de)(de)(de)細胞微球(qiu)的(de)(de)(de)丟失(shi)或損傷

3. 培養孔的底(di)(di)部(bu)設有直徑為1mm的平底(di)(di)觀察窗(chuang)，可以方便(bian)地進行細(xi)胞(bao)微球的定位和觀察，避免了一般圓底(di)(di)ULA板成像(xiang)時的局部(bu)變(bian)形

4. InSphero Akura 384孔(kong)細胞微孔(kong)板可以(yi)與更先進(jin)的成像和(he)自(zi)動化液體處(chu)理系(xi)統兼容以(yi)開(kai)展高通(tong)量實驗，培養孔獨特的黑(hei)色壁體可以(yi)有(you)效消除孔間(jian)的熒(ying)光(guang)串擾

自備(bei)材料

1. 實(shi)驗細(xi)胞與合適的培(pei)養基

2. 倒置顯微鏡

3. 細(xi)胞計(ji)數工具(ju)

4. 移液器/自(zi)動化(hua)液體處理系統(tong)

5. 板(ban)孔離心機(ji)

6. 二氧化碳培養箱（設(she)置為5%濃度二氧化碳，95%相(xiang)對濕(shi)度，37攝氏(shi)度）

實驗前準備

1. 培養基于37攝氏(shi)度預熱

2. 用70%乙醇(chun)擦拭微孔板(ban)的外包裝

3. 在無菌操(cao)作環境(jing)下小心地打(da)開(kai)微孔板的外包裝(zhuang)

實驗步驟

預濕潤(run)

* 推薦(jian)在無菌操作環(huan)境下(xia)執行預潤濕的操作，可以有效防止培養孔中的氣泡產生。

1. 向(xiang)孔(kong)內加入(ru)40uL含有FCS或BSA的(de)培養(yang)基(ji)，加入(ru)時注意(yi)使(shi)移液(ye)器的(de)吸頭盡(jin)量靠近培養(yang)孔(kong)的(de)底(di)部(bu)，但是注意(yi)不要觸碰到(dao)培養(yang)孔(kong)的(de)底(di)部(bu)（對于InSphero Akura 96孔(kong)細胞微(wei)孔(kong)板，推薦(jian)使(shi)用8/12通道移液(ye)器以(yi)縮短操作時間）。

2. 使用(yong)移液器(qi)吹洗培養(yang)基以濕潤(run)培養(yang)孔，此(ci)步驟應小心操(cao)作避(bi)免產(chan)生氣泡。

3. 將吸頭停靠在培養孔內的吸頭停靠處（此處非常重要，請仔細參考前文的“產品特色”部分，不正確的操作可能會損壞微孔板并影響其性能），將孔內的所有培養基吸出（根據微孔板的設計，InSphero Akura 96孔細胞微孔板將殘留少于5-7uL的培養基，InSphero Akura 384孔細胞微孔板將殘留少于2-3uL的培養基，可以忽略不記）。

細胞(bao)接種

1. 依據實驗(yan)設計，將要接種的細(xi)(xi)胞(bao)或細(xi)(xi)胞(bao)混合物制備(bei)成單細(xi)(xi)胞(bao)懸(xuan)液(ye)。

2. 使(shi)用血球計(ji)數(shu)板或其他合(he)適(shi)的細胞計(ji)數(shu)工具進(jin)行細胞計(ji)數(shu)，并確定合(he)適(shi)的細胞接種(zhong)密度。

3. 使用移液器充分吹洗細胞懸液，確保懸液中的細胞均勻分布，并取合適數量的細胞，用培養基將體積補足70uL（InSphero Akura 96孔細胞微孔板）/50uL（InSphero Akura 384孔細胞微孔板）。

* 推薦的細(xi)(xi)(xi)胞接(jie)種密(mi)度：用于(yu)增殖細(xi)(xi)(xi)胞的長期培(pei)養(yang)(yang)，建議使用較低的起始(shi)密(mi)度，建議每孔接(jie)種250-500細(xi)(xi)(xi)胞；用于(yu)非增殖細(xi)(xi)(xi)胞的培(pei)養(yang)(yang)或需要快速獲得(de)較大體(ti)積的細(xi)(xi)(xi)胞微球體(ti)，建議每孔接(jie)種2500-25000細(xi)(xi)(xi)胞。

4. 緩慢地將細胞液接入微孔板上對應的培養孔中，該過程應盡量保持輕柔（移液速度小于10uL/sec），并盡量避免吸頭觸碰培養孔的底部。

細胞沉降和細胞微球體(ti)形(xing)成

* 為了達到(dao)更佳的(de)實驗(yan)效果，可(ke)能需要優化細胞(bao)(bao)培養(yang)(yang)的(de)條(tiao)(tiao)件，例如(ru)：調整細胞(bao)(bao)接種密度或培養(yang)(yang)基(ji)成分，或通過添加(jia)支持細胞(bao)(bao)（supporting cells，如(ru)基(ji)質(zhi)分泌細胞(bao)(bao)）或添加(jia)劑（如(ru)ECM），對于(yu)初次開展3D培養(yang)(yang)的(de)細胞(bao)(bao)類型，建議嘗(chang)試(shi)多種的(de)細胞(bao)(bao)培養(yang)(yang)條(tiao)(tiao)件。

1. 將InSphero Akura 96/384孔細胞微(wei)孔板蓋(gai)(gai)好(hao)蓋(gai)(gai)子并放入板孔離心機(ji)中(zhong)，250 x g（RCF）離心2min。

* 該離(li)(li)心(xin)步驟是選(xuan)做(zuo)步驟，不過短暫(zan)的(de)(de)離(li)(li)心(xin)可以幫助去除培養(yang)孔內的(de)(de)殘留氣泡并幫助細(xi)胞沉降至培養(yang)孔的(de)(de)底部以促進(jin)細(xi)胞微球體(ti)的(de)(de)生成。

2. 將InSphero Akura 96/384孔細(xi)胞微孔板移入二(er)氧化碳培養箱中，并將InSphero Akura 96/384孔細(xi)胞微孔板傾斜(xie)30°放置或使用InSphero Akura傾斜(xie)支架（CS-10-002-00），以促(cu)進細(xi)胞微球體的形成。

3. 在適宜的(de)條件下(xia)培(pei)養(yang)2-5天，每天觀察細(xi)胞微球體(ti)的(de)形態，并在需要時更換培(pei)養(yang)基。

培養基(ji)更換

* 通常情(qing)況下，細胞微球體的培養(yang)每周需要更換(huan)2-3次培養(yang)基，具體更換(huan)頻率依據實際情(qing)況而(er)定(ding)

1. 將InSphero Akura 96/384孔(kong)(kong)細(xi)胞微孔(kong)(kong)板從二氧化碳培養箱中(zhong)取(qu)出，并以合適的方向(xiang)擺放（尤其是(shi)對(dui)于InSphero Akura 384孔(kong)(kong)細(xi)胞微孔(kong)(kong)板）。

2. 將(jiang)移(yi)液器的吸頭沿著孔壁慢慢下滑直至感(gan)受到(dao)吸頭停靠處帶來的觸覺反(fan)饋，并將(jiang)培養孔內的培養基(ji)(ji)完全(quan)吸出（除了(le)培養孔深處殘留(liu)的微量培養基(ji)(ji)），此(ci)步(bu)驟應盡量輕緩，建議的移(yi)液速度小于(yu)10-20uL/sec。

3. 將移(yi)液(ye)器(qi)的吸頭(tou)沿著孔(kong)壁慢慢下滑直(zhi)至(zhi)感受到吸頭(tou)停靠處帶來的觸覺反饋，并(bing)加入70uL（InSphero Akura 96孔(kong)細(xi)胞(bao)(bao)微孔(kong)板）/50uL（InSphero Akura 384孔(kong)細(xi)胞(bao)(bao)微孔(kong)板）預熱的新培養基，此步驟應(ying)盡量輕緩(huan)，建議(yi)的移(yi)液(ye)速度小(xiao)于10-20uL/sec（對于InSphero Akura 96孔(kong)細(xi)胞(bao)(bao)微孔(kong)板，移(yi)液(ye)速度可以適當放寬至(zhi)小(xiao)于50uL/sec）。

4. 如果要求更加(jia)徹(che)底的(de)培(pei)養(yang)基更換，可以(yi)重(zhong)復(fu)第3-4步。

5. 將InSphero Akura 96/384孔(kong)細胞微孔(kong)板放回二(er)氧化碳培(pei)養箱中繼續培(pei)養。

* 如需(xu)要了解(jie)更多操作(zuo)細節或使用自動化液體處(chu)理系(xi)統，請聯系(xi)曼(man)博生物技(ji)術支持。

細胞(bao)微(wei)球體(ti)收取或轉(zhuan)移-InSphero Akura 96孔細胞(bao)微(wei)孔板

1. 在收取細胞微球體之前，使用至少60uL的100% FCS預濕潤吸頭，該步驟可以有效防止細胞微球體黏附在吸頭內側。

2. 方案一：使用1000uL的移液器和吸頭，沿著培養孔側壁緩緩往下移動直到感受到觸覺反饋，此時吸頭的尖部正好位于細胞微球體的上側，可以直接吸取細胞微球體。

* 1000uL的吸頭尖部(bu)直徑略微大于培養孔的底部直徑，所以可以避免在吸取細胞微球體時對其造成擠壓。

3. 方案二：使用100-200uL的移液器和吸頭，小心保持一個較小的角度并沿著培養孔側壁緩緩往下移直至觸碰到培養孔底部，吸取細胞微球體。

* 100-200uL的吸頭尖部小于培養孔的底部直徑，如果不能保持一個較小的傾斜角度可能會導致吸取過程中細胞微球體的擠壓受損。

4. 將細胞(bao)微球體轉(zhuan)移至合適的容(rong)器中。

細(xi)(xi)胞微(wei)球體收(shou)取或轉移-InSphero Akura 384孔細(xi)(xi)胞微(wei)孔板

1. 在收(shou)取細胞(bao)(bao)微球體(ti)之前，使用至少50uL的100% FCS預濕潤吸頭，該步驟可以有效(xiao)防止細胞(bao)(bao)微球體(ti)黏(nian)附在吸頭內側。

2. 單個細胞微球體的收取：使用1000uL的移液器和加長的吸頭（如1250uL吸頭），沿著培養孔側壁（靠近板孔下側的一側，即吸頭停靠處的對側）緩緩往下移動直到感受到觸覺反饋，此時吸頭的尖部正好位于細胞微球體的上側，可以直接吸取細胞微球體。

3. 連續(xu)細胞微(wei)球體的(de)(de)(de)吸(xi)取：InSphero Akura 384孔(kong)細胞微(wei)孔(kong)板可(ke)以支持連續(xu)的(de)(de)(de)吸(xi)取。如需要進行連續(xu)細胞微(wei)球體的(de)(de)(de)吸(xi)取，在(zai)實(shi)驗開(kai)始(shi)前需要使用(yong)130uL的(de)(de)(de)100% FCS預濕潤吸(xi)頭(tou)。詳細的(de)(de)(de)操(cao)作細節，請聯系曼博生物技術支持。