產品簡介

InSphero Akura PLUS懸滴系統是一種(zhong)簡單、靈活且能兼(jian)容自動化系統(tong)的(de)操作平臺(tai)，用(yong)于無支(zhi)架3D細(xi)胞(bao)培養(yang)、觀(guan)察和(he)觀(guan)測。每(mei)套InSphero Akura PLUS懸滴系統是由一塊InSphero Akura PLUS懸滴板和一塊InSphero Akura 96孔細胞微孔板組成。平日里，InSphero將該懸滴系統用于大規模的無支架3D細胞培養、類器官培養和即用型細胞微組織的生產。

產品優勢

1. 使用(yong)InSphero Akura PLUS懸滴板可(ke)以(yi)形成穩健的(de)包含細胞微球(qiu)體的(de)懸滴，輕松開展無支架3D細胞培(pei)養(yang)、類(lei)器官培(pei)養(yang)等工作

2. 包含細胞微球體的懸滴可以方便地轉移到InSphero Akura 96孔細胞微孔板中繼續培養

3. 細胞(bao)微球體在具有特(te)殊設(she)計的InSphero Akura 96孔細胞(bao)微孔板中，可(ke)以(yi)方便地進行長(chang)時(shi)間(jian)的培養、分析和觀察

自備材料

1. 實(shi)驗細胞與合適的(de)培養基

2. 倒(dao)置顯(xian)微鏡(jing)

3. 細(xi)胞(bao)計(ji)數(shu)工具

4. 移液器/自動化液體處理系統

5. 板孔(kong)離心(xin)機

6. 二氧化碳培養箱（設(she)置為(wei)5%濃度(du)(du)二氧化碳，95%相對濕(shi)度(du)(du)，37攝氏度(du)(du)）

7. PBS

實(shi)驗前(qian)準備

1. 培(pei)養基于37攝氏度預熱(re)

2. 用70%乙醇擦拭微孔板的外包裝

3. 在無菌操(cao)作環(huan)境(jing)下(xia)小心地打開微孔板的(de)外包裝

4. 檢查(cha)InSphero Akura PLUS懸滴系(xi)統(tong)里的組分是否完整：

(1) InSphero Akura PLUS懸滴(di)板：帶有蓄液功(gong)能(neng)的底板，懸滴(di)板框架，板蓋，加濕(shi)墊(dian)和鑷子

(2) InSphero Akura 96孔(kong)細胞微(wei)孔(kong)板：微(wei)孔(kong)板，板蓋

實(shi)驗(yan)步驟

加濕墊(dian)準備

1. 準備一個(ge)具有(you)蓄液功能(neng)的無菌容器(qi)（如(ru)10cm細胞培養皿），向其(qi)中加入20mL的0.5X PBS

2. 取出加(jia)(jia)濕(shi)(shi)墊，用鑷子夾取加(jia)(jia)濕(shi)(shi)墊轉入裝(zhuang)有PBS的容器中浸泡直至加(jia)(jia)濕(shi)(shi)墊完全濕(shi)(shi)潤(run)（此(ci)過程約需要5min）

3. 將懸滴(di)板框架從底板中(zhong)暫時(shi)移出，用(yong)鑷子(zi)夾取加濕墊并放置(zhi)在底板中(zhong)，放回懸滴(di)板框架

細胞接(jie)種和懸滴形成

1. 依據實驗設計(ji)，將要接種的細胞或細胞混(hun)合(he)物制備成單細胞懸液(ye)

2. 使用血球計數板或其他合適的細(xi)胞(bao)(bao)計數工具進行細(xi)胞(bao)(bao)計數，并確定合適的細(xi)胞(bao)(bao)接種密度

3. 使用(yong)移(yi)液(ye)(ye)器充分吹洗細(xi)胞(bao)懸液(ye)(ye)，確保懸液(ye)(ye)中的細(xi)胞(bao)均勻(yun)分布，并(bing)取合適數量的細(xi)胞(bao)，用(yong)培養基將體積補(bu)足40uL

* 推薦的(de)細(xi)胞接(jie)種(zhong)密(mi)度：用(yong)于增(zeng)殖細(xi)胞的(de)長期培(pei)養，建(jian)議(yi)使用(yong)較低的(de)起始密(mi)度，建(jian)議(yi)每孔(kong)接(jie)種(zhong)250-500細(xi)胞；用(yong)于非(fei)增(zeng)殖細(xi)胞的(de)培(pei)養或需要快速獲得(de)較大體積的(de)細(xi)胞微(wei)球體，建(jian)議(yi)每孔(kong)接(jie)種(zhong)2500-25000細(xi)胞

4. 緩慢地(di)將(jiang)40uL的細胞(bao)液(ye)接(jie)入懸滴板(ban)上對應的培(pei)養孔中(zhong)，在加入液(ye)體時要確保吸頭尖端(duan)與(yu)板(ban)子(zi)間的緊密接(jie)觸

5. 板(ban)蓋(gai)蓋(gai)好后轉移入二(er)氧化碳(tan)培養箱(xiang)中培養，并定期(qi)評估細胞微球體(ti)的生長(chang)狀況。正常情況下，大部(bu)分類型的細胞經過4天的培養便可以(yi)聚集形成緊密的細胞微球體(ti)

* 需注意：在移動InSphero Akura PLUS懸滴板時需要格外當心，以防止(zhi)懸滴液的滴落而影(ying)響實驗結(jie)果

細胞微球體的轉(zhuan)移

* 如需要(yao)長期培養細胞微球體(ti)，則(ze)要(yao)將細胞微球體(ti)轉(zhuan)移入InSphero Akura 96孔細胞微孔板中

InSphero Akura 96孔(kong)細胞微孔(kong)板(ban)的介(jie)紹和使用方(fang)法請參考相應(ying)的使用說明(ming)。在開始(shi)操作本步驟之前(qian)，應(ying)該按(an)照要求提前(qian)預濕潤InSphero Akura 96孔(kong)細胞微孔(kong)板(ban)

1. 將InSphero Akura PLUS懸滴板的(de)懸滴框架小(xiao)心取下，置于InSphero Akura 96孔(kong)細胞微(wei)孔(kong)板的(de)上方。兩者(zhe)可以通(tong)過板框周邊的(de)三個(ge)針腳(jiao)確(que)定位置

2. 使用移(yi)液器(qi)緩慢地向InSphero Akura PLUS懸滴框架的每(mei)個孔中加入70uL的培(pei)(pei)養(yang)(yang)基，在加入液體時要確保吸頭尖(jian)端(duan)與板子間的緊(jin)密接觸。加入液體后，懸滴便會(hui)落入下方的InSphero Akura 96孔細胞微孔板相應培(pei)(pei)養(yang)(yang)孔中

3. 使用倒(dao)置顯微(wei)鏡檢查(cha)每個培(pei)養孔中的細胞微(wei)球體是否成(cheng)功轉移

4. 將InSphero Akura 96孔(kong)細胞(bao)微孔(kong)板(ban)蓋好蓋子并放入板(ban)孔(kong)離心機中，250 x g（RCF）離心2min，以幫助去(qu)除培養孔(kong)內的殘留(liu)氣泡(pao)并幫助細胞(bao)沉降至(zhi)培養孔(kong)的底部

5. 為(wei)了確(que)保每個培(pei)(pei)養(yang)(yang)孔(kong)中的(de)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)體積準確(que)，應執行(xing)換液操作(zuo)，吸去培(pei)(pei)養(yang)(yang)孔(kong)內的(de)所有(you)培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)，然后重新(xin)加入70uL的(de)新(xin)鮮培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)（遵照(zhao)InSphero Akura 96孔(kong)細胞微(wei)孔(kong)板的(de)使用說明執行(xing)更(geng)換培(pei)(pei)養(yang)(yang)基(ji)的(de)操作(zuo)）