一、介紹

·  同種異體細(xi)胞(bao)療(liao)法的成功商業化需要優化組(zu)織獲取和(he)培(pei)養之間初始細(xi)胞(bao)擴增的過程。

·  本文研究(jiu)者(zhe)們(men)正在開發一種細胞療法來治療腰(yao)痛(tong)。起(qi)始材料是成人椎間盤組織。

·  在這(zhe)項研(yan)究中，研(yan)究人員探(tan)索(suo)了(le)組(zu)織在獲得后和(he)加工前在低溫保存(cun)介質中4℃存(cun)放的穩定性。隨后，研(yan)究者探(tan)索(suo)了(le)使用PBS垂直輪(lun)式反應器來加速酶驅動的組(zu)織解離。

Figure 1: 制備椎間(jian)盤細(xi)胞(bao)的過程(cheng)。

(A)獲取成人椎(zhui)間盤組織，并保存(cun)在Biolife Hypothermasol低溫保存(cun)液中；

(B)通過專有的多步驟工藝(yi)產生椎間盤細胞；

(C)創建椎間盤(pan)細(xi)胞(bao)冷凍庫;發布測試以確(que)保安(an)全性(xing)和一(yi)致性(xing)。

二、實驗方法(fa)

·  為(wei)了評估組(zu)織保存(cun)的(de)穩定(ding)性，將切碎的(de)人髓核(he)組(zu)織在(zai)Hypothermasol(BioLife Solutions)中在(zai)4℃下保存(cun)1.5、3.5或5.5天(tian)。活/死(si)熒光(guang)染(ran)色用(yong)于觀察(cha)每個時間(jian)點的(de)細(xi)胞(bao)。然后，酶解分(fen)離細(xi)胞(bao)并將其種在(zai)燒(shao)瓶(ping)里(li)。定(ding)期捕(bu)獲燒(shao)瓶(ping)的(de)圖(tu)像以監(jian)測細(xi)胞(bao)貼壁和增殖情況。

·  為了加(jia)速組織酶解，將(jiang)組織放(fang)入PBS-0.5垂直輪生物反應器(28-40 RPM,PBS Biotech公司(si)的PBS Mini 0.5L)中(zhong)運行并監測分離，直到塊狀物不再可見。

三、結果

·  椎(zhui)間盤組織在hypothermasol中保存5天后，含有活細胞。5.5天后組織的活/死染色如下圖2所(suo)示，活細胞染成綠色（圖2A）。

·  細胞在每個條件下都能(neng)成(cheng)功生長（圖2B）。

Figure 2：(A) 5.5天后組織(zhi)的活/死染色(se)；(B) 燒瓶上細胞的10倍相差(cha)圖片。

·  在(zai)三(san)個(ge)獨立的實驗中，組織分離的時(shi)間從14-20小(xiao)時(shi)減少到不到5小(xiao)時(shi)(圖(tu)3)。

Figure 3：(A)PBS垂(chui)直輪式反應器中組織的酶解(jie)作用。(B)在3個樣品中，完成組織解(jie)離的速度都比以往(wang)傳統方法解(jie)離得快。

四、總結

·  本文中(zhong)研究者已經確定了重(zhong)要技術，以(yi)提高制造加工的(de)靈活性和效率(lv)。這(zhe)些新方(fang)法仍然(ran)會在培(pei)養過(guo)程結束時產(chan)生(sheng)可比量的(de)細胞。

·  研究(jiu)者正在對培養過程的其他階段進行優(you)化研究(jiu)，這可能會(hui)影響成本、一致性(xing)和質(zhi)量。

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從原代組(zu)織(zhi)、細胞或器官(guan)從采集(ji)到(dao)處理(li)之間，運輸過程中可能(neng)會用到(dao)的Biolife HypoThermosol FRS低(di)溫保存液(ye)：

·  是一種優(you)化的低溫（+2°C 至 +8°C）保存培養基

· ; 專門配制用(yong)于在低(di)溫(wen)(wen)儲存期間(jian)支持組織(zhi)樣本(ben)，并通過(guo)平衡(heng)的(de)離子和(he)分(fen)子、有針對性的(de) pH 緩沖(chong)和(he)有效(xiao)的(de)自(zi)由基清除劑解(jie)決低(di)溫(wen)(wen)帶來的(de)壓力，通過(guo)減(jian)少凋亡(wang)和(he)壞死引發的(de)細(xi)胞死亡(wang)，從(cong)而改善和(he)延長(chang)細(xi)胞、組織(zhi)和(he)器(qi)官的(de)保(bao)存時間(jian)

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·  FDA主文件備案(an)

·  具有輔(fu)料資質，已支(zhi)持近(jin)30種(zhong)細胞治療藥物IND申報

（2）PBS垂(chui)直輪(lun)生物反應器

此外，本文使(shi)用的(de)具有獨特(te)設(she)計的(de)PBS垂直(zhi)輪(lun)生(sheng)物反(fan)應器(qi)（由美國PBS Biotech公司研(yan)發(fa)生(sheng)產(chan)），可(ke)以低功率(lv)輸入可(ke)帶來(lai)(lai)(lai)有效的(de)顆(ke)粒懸浮(fu)，帶來(lai)(lai)(lai)低剪(jian)切(qie)力(li)的(de)均勻水動(dong)力(li)學(xue)環境(jing)，適用于對剪(jian)切(qie)力(li)敏感(gan)的(de)細胞(bao)治療型產(chan)品(pin)的(de)擴增及(ji)分(fen)(fen)化(hua)，類(lei)器(qi)官培養，包(bao)括(kuo)但(dan)不限(xian)于iPSC、MSC、原代(dai)NK和T擴增、iPSC來(lai)(lai)(lai)源NK、T、islets等(deng)分(fen)(fen)化(hua)及(ji)擴增過程。

·  產(chan)品(pin)有早(zao)研(yan)微縮模型（0.1L，0.5L）至臨(lin)床生產(chan)規模GMP級(ji)（3L、15L和80L）型號(hao)規格(ge)

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·  3L以上有GMP版本，產品(pin)接觸材料(liao)經測(ce)試和(he)認證，符合早(zao)期臨床(chuang)階段的安全和(he)法規要(yao)求，包括人體實驗

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