Qkine FGF2-G3介紹

FGF2-G3是FGF-2的(de)(de)高度生(sheng)物活(huo)性(xing)和熱穩(wen)(wen)定(ding)（耐熱）的(de)(de)改良型，用于支持同(tong)質(zhi)均(jun)勻和可(ke)重復的(de)(de)干(gan)細(xi)胞培養(yang)(yang)， 同(tong)時避免了(le)頻繁(fan)更(geng)換(huan)(huan)培養(yang)(yang)基(ji)的(de)(de)需要。野(ye)生(sheng)型FGF-2天然(ran)不穩(wen)(wen)定(ding)，易(yi)于蛋(dan)(dan)白酶降解和聚集(ji)，導(dao)致在培養(yang)(yang)基(ji)中(zhong)(zhong)的(de)(de)半(ban)衰期短（<10小時），需要頻繁(fan)更(geng)換(huan)(huan)培養(yang)(yang)基(ji)，以及培養(yang)(yang)過(guo)程中(zhong)(zhong)的(de)(de)變異(yi)。FGF2-G3經過(guo)了(le)九個(ge)氨基(ji)酸替換(huan)(huan)的(de)(de)改良，以增強穩(wen)(wen)定(ding)性(xing)而不影響生(sheng)物活(huo)性(xing)。這將蛋(dan)(dan)白質(zhi)的(de)(de)功能半(ban)衰期從野(ye)生(sheng)型的(de)(de)<10小時提高到培養(yang)(yang)基(ji)中(zhong)(zhong)的(de)(de)＞7天（FGF2-G3）。使用熱穩(wen)(wen)定(ding)的(de)(de)FGF2-G3提供(gong)了(le)一(yi)種改良的(de)(de)替代方案，節省(sheng)了(le)研究人員寶貴的(de)(de)時間(jian)和金錢，減少了(le)培養(yang)(yang)基(ji)更(geng)換(huan)(huan)的(de)(de)次數。

Innovation & engineering

FGF2-G3，或稱(cheng)為FGF2-STAB，是(shi)由Masaryk大(da)(da)學的(de)Dvorak及其同事利用計(ji)算輔助蛋(dan)(dan)白質工(gong)程開發 的(de)，以確定(ding)穩(wen)定(ding)FGF-2的(de)更佳九(jiu)個(ge)氨基酸(suan)替換。Qkine從(cong)(cong)Enantis/Masaryk大(da)(da)學獲得了(le)FGF2-G3技術許可，并將(jiang)該技術與(yu)我們的(de)蛋(dan)(dan)白質制(zhi)(zhi)造(zao)專業知識結合起來，制(zhi)(zhi)造(zao)了(le)一種無(wu)動(dong)物(wu)成分、無(wu)載體蛋(dan)(dan)白、無(wu)His標簽的(de)生長因子，從(cong)(cong)而實現(xian)了(le)從(cong)(cong)研究到(dao)臨(lin)床或規模化應用的(de)轉化。

Qkine FGF2-G3 產品特色

享受休息日(ri)無憂的熱(re)穩(wen)定FGF2-G3干(gan)細胞(bao)培(pei)養(yang)。Qkine的FGF2-G3可(ke)以在(zai)不同的應用中替代(dai)野生型FGF-2。它可(ke)以作為常見培(pei)養(yang)基(ji)配方（包(bao)括mTeSR、StemPRO和E8）的成分之一(yi)，用于(yu)調節關鍵細胞(bao)過程(cheng)并維持多(duo)能性。

FGF2-G3 的功能與作用

與德國DZNE合作(zuo)，研究了(le)(le)FGF2-G3在iPSC培養(yang)中(zhong)的(de)效果。使(shi)用(yong)FGF2-G3的(de)iPSC的(de)穩(wen)定性在培養(yang)基中(zhong)進行了(le)(le)72小(xiao)時的(de)檢(jian)測(ce)，顯示(shi)出增強的(de)集(ji)落健康狀態(tai)(tai)，維(wei)持持續增殖狀態(tai)(tai)，無需每日(ri)(ri)更換(huan)培養(yang)基（圖1）。基于多(duo)(duo)能(neng)性標記物Oct4的(de)表達水平，FGF2-G3也(ye)顯示(shi)出維(wei)持多(duo)(duo)能(neng)性的(de)能(neng)力，并減少了(le)(le)培養(yang)基更換(huan)的(de)次(ci)數(shu)（圖 2）。最終(zhong)，使(shi)用(yong)FGF2-G3和休息(xi)日(ri)(ri)無憂的(de)細胞培養(yang)方法展(zhan)示(shi)了(le)(le)胚胎(tai)體的(de)形成（圖3）。

1.在(zai)不更換培養(yang)基(ji)的情況下(xia)，將iPSCs在(zai)mTeSR1培養(yang)基(ji)中與Qkine FGF2-G3共培養(yang)3天。

2.在(zai)不更換培(pei)養基的情況下，將(jiang)Oct4+ iPSCs在(zai)mTeSR1培(pei)養基中與Qkine FGF2-G3共(gong)培(pei)養5天。

3.在不更換培(pei)養基的(de)情(qing)況下(xia)，將胚(pei)胎(tai)體在mTeSR1培(pei)養基中與Qkine FGF2-G3共培(pei)養3天。

Image Credit: Joshua Thomas &amp; Felix Buchner, Deutsches Zentrum für Neurodegenerative Erkrankungen (DZNE), Germany

每個步(bu)驟都進行(xing)嚴格的質量控制

每個Qkine蛋白(bai)質(zhi)(zhi)均在(zai)我們(men)獲得ISO9001:2015認(ren)證的(de)(de)(de)設施中生產，并在(zai)整(zheng)個過程(cheng)中采取嚴(yan)格(ge)的(de)(de)(de)質(zhi)(zhi)量(liang)控制 措施。我們(men)對每個批(pi)次使(shi)用(yong)各種分(fen)析技(ji)術，以確保(bao)出(chu)色的(de)(de)(de)質(zhi)(zhi)量(liang)和批(pi)次間的(de)(de)(de)一致性(xing)。生物活(huo)性(xing)測(ce)定(ding)和SDS- PAGE凝(ning)膠(jiao)電泳只是(shi)我們(men)用(yong)來保(bao)證高(gao)度(du)生物活(huo)性(xing)和純(chun)度(du)的(de)(de)(de)一些(xie)技(ji)術之一。如果(guo)您想查看特定(ding)批(pi)次的(de)(de)(de)完整(zheng)質(zhi)(zhi)量(liang)控制數據(ju)，請聯(lian)系我們(men)獲取。

FGF2-G3在(zai)還原和非還原條件下的(de)SDS-PAGE

通過15%（w/v）SDS-PAGE在還原（+β-巰基乙醇，R）和非還原（ NR）條件下分離純化的重組蛋白質（3 μg），并用考馬斯亮藍R250染色。在非還原（NR）條件下，重組FGF2-G3遷移為一個主要的17kDa帶。在還原（R）條件下，只有17kDa的帶可見。未檢測到污染蛋白帶，突顯了蛋白質的純 度。數據來自Qk053批次＃104340。

熱(re)穩定(ding)的FGF2-G3在37°C的條件培(pei)養(yang)基中保持了野生(sheng)型(xing)的生(sheng)物活性(xing)超過7天，這使(shi)得干細(xi)胞培(pei)養(yang)具有可重(zhong)復(fu) 性(xing)和均一性(xing)，并且無需休息日更換培(pei)養(yang)基。Qkine的每個蛋白(bai)質(zhi)都經過生(sheng)物活性(xing)測試，使(shi)用校準的熒光素酶報告基因分析來定(ding)義感興趣蛋白(bai)質(zhi)的完整劑量-反應曲(qu)線，并確定(ding)其(qi)EC50值。

FGF2-G3在培養7天后仍(reng)然保持(chi)生(sheng)物活(huo)性。野生型FGF-2（Qk027）和FGF2-G3（Qk053）在條件培養基中稀釋后， 在37°C下孵育。每天取樣，進行序列稀釋，然后在轉染的HEK293T細胞中進行三重測定。測量了熒光素酶活性， 并進行了對照標準化。

進一步閱讀

Dvorak P, Bednar D, Vanacek P, et al. (2018) Computer-assisted engineering of hyperstable ?broblast growth factor 2. Biotechnol Bioeng. 115(4):850-862.

Kuo HH, Gao X, DeKeyser JM, et al. (2019) Negligible-Cost and Weekend-Free Chemically De?ned Human iPSC Culture. Stem Cell Reports. 14(2):256-270.

Benington L, Rajan G, Locher C, Lim LY. (2020) Fibroblast Growth Factor 2-A Review of Stabilisation Approaches for Clinical Applications. Pharmaceutics. 12(6):508. 

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