細(xi)(xi)胞(bao)(bao)因(yin)子/生長因(yin)子的質量(liang)是細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)體系的核心調控基石，其純度（如≥95% 無雜(za)質殘(can)留）直接決定細(xi)(xi)胞(bao)(bao)信號傳導的準(zhun)確性(xing)(xing)，內毒(du)素水平（≤0.5 EU/μg）超標會(hui)誘發細(xi)(xi)胞(bao)(bao)炎癥反應或凋亡；生物(wu)(wu)活性(xing)(xing)批(pi)間(jian)差異(yi)（如 ED50 波動≤10%）會(hui)影(ying)響實驗(yan)數據重(zhong)復性(xing)(xing)與(yu)工藝(yi)放大(da)穩定性(xing)(xing)；而(er)生產工藝(yi)中的動物(wu)(wu)源(yuan)成分殘(can)留（如無血清/無動物(wu)(wu)源(yuan)認證）可能引入病(bing)原體風險，破壞培養(yang)體系安全性(xing)(xing)。高質量(liang)細(xi)(xi)胞(bao)(bao)培養(yang)添加(jia)劑通過(guo)準(zhun)確模(mo)擬內源(yuan)性(xing)(xing)調控網絡(luo)，確保細(xi)(xi)胞(bao)(bao)在增(zeng)殖、分化、代謝等生命活動中維持天(tian)然表型與(yu)功能，這對科研(yan)實驗(yan)的可重(zhong)復性(xing)(xing)、工業生產的產量(liang)一(yi)致性(xing)(xing)以及細(xi)(xi)胞(bao)(bao)治療等臨床應用(yong)的合規性(xing)(xing)均具有決定性(xing)(xing)意義。

以下是研究人員在(zai)選擇和(he)使用重組(zu)蛋白因子時，經常關注和(he)詢問(wen)的(de)一些問(wen)題。由于篇幅有限(xian)，我們整理了(le)其中幾(ji)個常見問(wen)題，供大家參(can)考。

高頻問題一、為什么要關心重組蛋白因子的來源？ 

重組(zu)蛋(dan)白因子可以在(zai)原(yuan)核(he)細胞（較(jiao)常見的是大(da)腸桿菌）或真核(he)細胞中合成，使用細胞系(xi)，例如人胚(pei)胎腎(shen) (HEK) 293 細胞或中國倉鼠卵巢 (CHO) 細胞。這(zhe)些細胞來源各有優(you)勢。與真核(he)系(xi)統(tong)相比(bi)，原(yuan)核(he)來源產生的蛋(dan)白質(zhi)通(tong)常批次間差異較(jiao)小且純度更高。它們還(huan)具有不含(han)動物(wu)成分的額外優(you)勢，消(xiao)除(chu)了污(wu)染生長因子、病毒(du)、朊病毒(du)和其他動物(wu)源成分的風險(xian)。這(zhe)種生產方法還(huan)減(jian)少了對(dui)胎牛血清 (FBS) 的需求。

然而，當涉及(ji)到復雜的(de)全(quan)長哺乳動物(wu)蛋(dan)白(bai)質時，原核(he)系(xi)統(tong)可能(neng)會有(you)所不足；蛋(dan)白(bai)質重折疊和(he)(he)翻譯后修飾可能(neng)與真(zhen)(zhen)核(he)系(xi)統(tong)不同(tong)，這會影響蛋(dan)白(bai)質的(de)溶(rong)解度和(he)(he)活性。對于來自原核(he)和(he)(he)真(zhen)(zhen)核(he)來源的(de)生(sheng)長因子，請務必在購(gou)買(mai)前(qian)檢查生(sheng)物(wu)活性數據(ju)。

生長(chang)因子生產(chan)方面的(de)(de)創新使(shi)得(de)越(yue)來越(yue)多的(de)(de)蛋(dan)(dan)(dan)白質能夠使(shi)用原核系(xi)統生產(chan)，并且這些蛋(dan)(dan)(dan)白質無(wu)需(xu)動(dong)物來源(yuan)，同時保持正確的(de)(de)折疊和活性(xing)。Qkine lead這一(yi)潮流(liu)，其(qi)產(chan)品(pin)(pin)包括：TGF-β1 PLUS，shouge完(wan)全不(bu)含動(dong)物來源(yuan)的(de)(de) TGF-β1，以及人類R-spondin 1和R-spondin 3的(de)(de)生物活性(xing)片段，還有Qkine品(pin)(pin)牌下(xia)的(de)(de)100多種重(zhong)組蛋(dan)(dan)(dan)白產(chan)品(pin)(pin)，均在非(fei)動(dong)物源(yuan)環境下(xia)生產(chan)，不(bu)含動(dong)物源(yuan)成分，減少變異性(xing)，防止交叉污染；并且可(ke)(ke)提供(gong)全面的(de)(de)可(ke)(ke)追溯(su)性(xing)和文件記錄(lu)，以支(zhi)持未來的(de)(de)細胞治療和監(jian)管流(liu)程。尤其(qi)是，Qkine可(ke)(ke)生產(chan)市面上獨特的(de)(de)無(wu)動(dong)物源(yuan)重(zhong)組蛋(dan)(dan)(dan)白產(chan)品(pin)(pin)HGF、TGF-β1和DKK1。

圖1：Qkine高生物活性無動物來源(yuan)(AOF)的 DKK-1

高頻問題二、內毒素會引起什么問題？什么水平的內毒素污染是可以接受的？ 

內(nei)(nei)毒素(su)是(shi)小(xiao)的(de)(de)疏水(shui)性(xing)(xing)脂多糖(tang)分子，是(shi)革蘭(lan)氏陰(yin)性(xing)(xing)細菌(jun)外細胞膜中發現的(de)(de)一種有毒物質。細菌(jun)在細胞死亡(wang)或活躍生長和(he)分裂時會(hui)釋放內(nei)(nei)毒素(su)。內(nei)(nei)毒素(su)會(hui)影響細胞培養物的(de)(de)生長或性(xing)(xing)能，是(shi)實(shi)驗(yan)(yan)(yan)差異的(de)(de)主要(yao)來(lai)源。內(nei)(nei)毒素(su)具有非常高(gao)的(de)(de)熱穩定性(xing)(xing)，這意味著它們無法通過(guo)(guo)高(gao)壓(ya)滅菌(jun)等常規凈化方法破(po)壞。內(nei)(nei)毒素(su)也是(shi)疏水(shui)性(xing)(xing)的(de)(de)，因此(ci)對其他疏水(shui)性(xing)(xing)材料（如實(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)塑料）具有很強(qiang)的(de)(de)親和(he)力。可以通過(guo)(guo)清潔和(he)適當的(de)(de)實(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)技術來(lai)避免內(nei)(nei)毒素(su)，以控制實(shi)驗(yan)(yan)(yan)室(shi)中的(de)(de)內(nei)(nei)毒素(su)水(shui)平(ping)。

在Qkine內部，他(ta)們(men)通(tong)過(guo)良好的無菌技(ji)術、制造(zao)過(guo)程中使用的緩沖液通(tong)過(guo)過(guo)濾滅菌和(he)嚴格的凈化柱清潔流程來實(shi)現了這一點。這將較大限度(du)地(di)減少內毒素進(jin)入任何(he)制造(zao)/研究過(guo)程。并通(tong)過(guo)鱟變(bian)形細胞裂解物 (LAL) 檢測法確(que)定內毒素水(shui)平。該(gai)檢測法可以檢測到少至 0.01 內毒素單位(wei) (EU)/mL（1 EU約等于(yu) 0.1-0.2 ng 內毒素/mL溶(rong)液）。

當前(qian)行業標準要求生長因(yin)子(zi)批次中的內(nei)毒素水平低(di)于 0.5 EU/mL（值越低(di)越好），但Qkine 重(zhong)組蛋白因(yin)子(zi)的質(zhi)(zhi)量(liang)標準中要求每 μg 蛋白質(zhi)(zhi)內(nei)毒素含量(liang)低(di)于 0.1 EU，數(shu)值遠低(di)于于當前(qian)行業標準要求的≤0.5 EU/mL。這(zhe)也體現Qkine對(dui)因(yin)子(zi)質(zhi)(zhi)量(liang)的承諾。

圖2：Qkine因子TGF-b1 PLUS（貨號(hao)Qk010）#204573批次部分(fen)CoA數據(ju)展示，紅色(se)框分(fen)別為內毒(du)素和純度檢測數據(ju)。如想看(kan)Qkine產品完整CoA，可聯系(xi)曼博生物技術支持獲取

高頻問題三、Qkine的生長因子活性是否高于或低于其他供應商的蛋白質？ 

作為Qkine因(yin)子生(sheng)(sheng)物活性保(bao)證的(de)一(yi)部(bu)分，Qkine與當(dang)前主要供應(ying)商(shang)進(jin)行(xing)定(ding)量對(dui)比的(de)生(sheng)(sheng)物活性研究(jiu)，以(yi)確(que)保(bao)Qkine的(de)蛋白(bai)質生(sheng)(sheng)物活性相當(dang)或(huo)更優。在Qkine的(de)研發過(guo)(guo)程中，他們(men)始終會(hui)在重溶后校正蛋白(bai)質濃度，以(yi)確(que)保(bao)進(jin)行(xing)公平(ping)對(dui)比，并糾正瓶(ping)內回收率(lv)的(de)任何(he)差異。（通過(guo)(guo)查閱(yue)您感興趣的(de)Qkine因(yin)子的(de)技術說明，可(ke)以(yi)獲取(qu)生(sheng)(sheng)物活性比較數據）

示(shi)例(li)如下所(suo)示(shi)：IL-6 是一(yi)種多功能細胞因(yin)子，調節(jie)免疫(yi)(yi)反應(ying)和炎癥，其(qi)常用于培養免疫(yi)(yi)細胞和造(zao)血(xue)干細胞。驗證結果顯示(shi)Qkine 的 IL-6 不(bu)含動物(wu)來源(yuan)，無標簽和載(zai)體，且生(sheng)物(wu)活性更(geng)高。

圖3：Qkine的(de)IL-6（綠色(se)，Qk093）的(de)生物活性高(gao)于來自同類供(gong)應商的(de)蛋白(bai)（供(gong)應商 B，黑(hei)色(se)）。

高頻問題四、為什么Qkine的蛋白質不含標簽很重要？

首先(xian)，我們來(lai)了解下標(biao)簽(qian)序列。通常重組(zu)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)可(ke)(ke)以通過添加一個短(duan)的(de)(de)氨(an)基(ji)酸序列來(lai)“標(biao)簽(qian)化(hua)”，這個序列在自然界中(zhong)不存在，因(yin)此可(ke)(ke)以更容易地從(cong)復雜(za)的(de)(de)混(hun)合(he)物(wu)中(zhong)純(chun)化(hua)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)。其他常用(yong)的(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)標(biao)簽(qian)還可(ke)(ke)以用(yong)于后期(qi)的(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)修飾，如生(sheng)(sheng)物(wu)素化(hua)、與其他蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)質(zhi)偶(ou)聯(lian)以進行后續的(de)(de)生(sheng)(sheng)化(hua)實驗，或(huo)(huo)在蛋(dan)(dan)白(bai)(bai)表達(da)過程中(zhong)優化(hua)折疊(die)或(huo)(huo)產(chan)量。

為了提(ti)高依賴重(zhong)組蛋白(bai)的(de)(de)實(shi)驗可重(zhong)復性和可靠性，包括(kuo)生(sheng)化檢測(ce)和細(xi)胞培養(yang)（這些蛋白(bai)通常是(shi)細(xi)胞培養(yang)基的(de)(de)關鍵成分），除非(fei)應用(yong)特別要求帶(dai)標(biao)(biao)簽(qian)(qian)的(de)(de)蛋白(bai)，否則使用(yong)無(wu)標(biao)(biao)簽(qian)(qian)蛋白(bai)是(shi)十分重(zhong)要的(de)(de)。

大多數蛋(dan)(dan)白(bai)標簽較(jiao)小(xiao)，因此通常認為它們對蛋(dan)(dan)白(bai)質的(de)(de)影(ying)響很(hen)小(xiao)或沒有(you)影(ying)響。然而，文獻中有(you)幾個案例表(biao)明，標簽可(ke)能改(gai)變蛋(dan)(dan)白(bai)質的(de)(de)行為，有(you)時會帶來(lai)嚴重(zhong)后果(guo)。即使(shi)是一個小(xiao)的(de)(de)蛋(dan)(dan)白(bai)標簽，也很(hen)難預測它對蛋(dan)(dan)白(bai)質功能的(de)(de)影(ying)響。在臨(lin)床(chuang)或細(xi)胞農業（如培養肉、魚、脂肪和乳制(zhi)品）細(xi)胞制(zhi)造的(de)(de)背景下，標簽的(de)(de)存在可(ke)能會帶來(lai)更嚴重(zhong)的(de)(de)后果(guo)，因為它們引入了非自然的(de)(de)氨基(ji)酸序(xu)列，這些序(xu)列可(ke)能具有(you)過(guo)敏性，因此可(ke)能會受到監管機構的(de)(de)額外審查。

Qkine的重組蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)都不含(han)蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)標(biao)(biao)簽(qian)，但在(zai)為客戶定制生(sheng)產(chan)Avi-tag activin E PLUS時(shi)，廠家發現(xian)其生(sheng)物活性相(xiang)比無標(biao)(biao)簽(qian)版本(ben)有所下(xia)降，EC50提高(gao)了10倍（如下(xia)圖所示(shi)），提供(gong)了由于小的N端蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)標(biao)(biao)簽(qian)存在(zai)導致蛋(dan)白(bai)(bai)(bai)活性變(bian)化的直接(jie)實驗證據。

圖3：Avi標(biao)簽(qian)活(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)素(su)(su)E PLUS與無標(biao)簽(qian)活(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)素(su)(su)E PLUS的生物活(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)比較。重(zhong)組(zu)活(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)素(su)(su)E PLUS的活(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)通過在HEK293細胞(bao)中使(shi)用Smad報(bao)告基因實驗進行測定，細胞(bao)與活(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)素(su)(su)E共受體ALK7共同(tong)轉染(ran)。細胞(bao)被(bei)處(chu)(chu)理三次(ci)，分別加入(ru)梯(ti)度稀釋(shi)的活(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)素(su)(su)E PLUS（Qk067）或Avi標(biao)簽(qian)活(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)素(su)(su)E PLUS（Qk082），處(chu)(chu)理時(shi)間為6小時(shi)。熒光(guang)素(su)(su)酶(mei)活(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)被(bei)測量并歸(gui)一化到(dao)對照(zhao)組(zu)的Renilla熒光(guang)素(su)(su)酶(mei)活(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)。在活(huo)(huo)(huo)性(xing)(xing)素(su)(su)E PLUS的N端(duan)添加Avi標(biao)簽(qian)使(shi)得EC50約增加了10倍，從(cong)0.09 ng/ml增加到(dao)1 ng/ml。

總的來說(shuo)：

?  標簽(qian)可(ke)能(neng)會影響蛋白質(zhi)的折(zhe)疊和結構，從而影響蛋白質(zhi)功能(neng)和生物活性

?  雜(za)質可能會與標簽蛋(dan)白一起純化

?  帶標(biao)簽的重組(zu)蛋白(bai)不適用于受監管的應(ying)用，如細胞治療制造和細胞農業

?  當某個特定實驗(yan)應(ying)用需要(yao)特定標簽時，確(que)保(bao)蛋白質的(de)均一性和生物活性是(shi)十(shi)分重要(yao)的(de)。

高頻問題五、如何儲存生長因子？

生(sheng)長因子的(de)保質期受多種因素影響，包括儲存狀(zhuang)態、緩沖液成分、儲存溫(wen)度和蛋白質本身的(de)穩定性。一般而言，凍(dong)干的(de)生(sheng)長因子最穩定。

凍(dong)干(gan)蛋白(bai)質通常在室(shi)溫下(xia)穩定(ding)一個月（驗證可在室(shi)溫下(xia)穩定(ding)保存(cun) 3 天），或在 -20℃ 或 -80℃ 下(xia)冷凍(dong) 2 年。

補(bu)充：針對 TGF beta 家族(zu)（包括(kuo) Activins、BMP 和(he) GDF15）的(de)(de)特別指導TGF beta 家族(zu)蛋(dan)(dan)白和(he)其他生(sheng)(sheng)長因(yin)子(zi)在生(sheng)(sheng)理溶(rong)(rong)液(ye)中(zhong)的(de)(de)溶(rong)(rong)解度(du)(du)非常(chang)低。請遵循以下凍干細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)的(de)(de)處理指南，以盡量減少因(yin)沉淀或吸附到塑料上而導致的(de)(de)蛋(dan)(dan)白質損失。我們建議在細(xi)胞(bao)培養基或終(zhong)工作溶(rong)(rong)液(ye)中(zhong)稀(xi)釋之前，將(jiang)重組蛋(dan)(dan)白儲存在非常(chang)低的(de)(de) pH 值下。低 pH 值還將(jiang)有助于通過(guo)較大(da)限度(du)(du)地減少二硫鍵(jian)交換反應來保持(chi)蛋(dan)(dan)白質的(de)(de)正確二硫鍵(jian)結(jie)構。

1. 在(zai)生理緩沖液(ye)中重新懸浮可能會導致原(yuan)液(ye)沉淀，因此我們建(jian)議將凍干細(xi)胞因子(zi)溶解(jie)在(zai) 10 mM HCl（濃(nong) HCl 的 1:1000 稀釋度）中，同時保(bao)持蛋白(bai)質濃(nong)度在(zai) 50 μg/ml 或以上(shang)，以避免因吸附到塑(su)料器(qi)皿上(shang)而造成損失。

2. 為了確保恢(hui)復全部蛋白質(zhi)，讓樣(yang)品在室(shi)溫下與溶解緩沖液(ye)一起(qi)靜置幾分鐘，然(ran)后(hou)輕輕上下移液(ye)（避免起(qi)泡）。

3. 用更多(duo)的 10 mM HCl 沖洗試管(guan)并將其(qi)與剩(sheng)余物匯(hui)集(ji)在一起。

4. 蛋(dan)白質可以(yi)耐受一定程度的凍融(rong)循環，但與蛋(dan)白質一樣(yang)，建議分裝并冷凍保存(cun)。

5. 曼(man)博生物提供(gong)的Qkine因子不含(han)載體(ti)蛋(dan)白的蛋(dan)白質。如(ru)果(guo)與您(nin)的工作兼(jian)容(rong)，請添加您(nin)選擇的載體(ti)蛋(dan)白，如(ru) BSA、HSA 或明膠，以進一步減少(shao)吸附損失(shi)。

6. 長期儲存溫度為-80℃。短期儲存溫度為-20℃。

Qkine高純度高活性蛋白：「長期主義」背后的品質邏輯

九項Qkine質量承諾概括了以(yi)客戶應用為先的價值主(zhu)張：

1. 認證的(de)無動物源(yuan)成分，具有全(quan)面的(de)可追溯性

2. ISO 9001:2015制造設施中生產

3. 準確的(de)蛋(dan)白質從小瓶中回收

4. 定量生物活性分析，集成批次間(jian)可(ke)重(zhong)復性

5. 較高的(de)蛋白純度水平(ping)（國產一般是(shi)95%，Qkine>98%）

6. 針對結構復雜的生物活性蛋白(bai)進行全面(mian)的身(shen)份(fen)分析

7. 較高(gao)的低內毒素水平 <0.005 EU/μg protein belowlevel of detection)

8. 嚴格測試(shi)無(wu)菌性(xing)和無(wu)支原體(ti)

9. 設計驅(qu)動的(de)蛋(dan)白(bai)質質量

Qkine秉持產品質量承諾的同時，也收獲了客戶一致好評和復購！

在細胞治(zhi)療(liao)競速、類器官(guan)新藥崛起的當下(xia)，“準確(que)、穩定、可復現” 的細胞因子，既是科研突(tu)破的催化劑，也是產業(ye)轉(zhuan)化的壓(ya)艙石。當越來越多客(ke)戶感慨 “終于找(zhao)到不用‘試(shi)錯’的因子” 時，這(zhe)背后，正是曼博與(yu)Qkine對 “科研級(ji)品質” 的堅守。

QKine總部位于(yu)英(ying)國(guo)(guo)劍(jian)橋(qiao)，是專業的生物(wu)(wu)(wu)活(huo)性(xing)重組蛋白(bai)制造商(shang)。客(ke)戶遍布全(quan)球幾(ji)十個國(guo)(guo)家。其重組蛋白(bai)技術源于(yu)劍(jian)橋(qiao)大學，由科學家帶領和運營(ying)，其主要領導(dao)團隊來自抗體蛋白(bai)品牌商(shang)Ab。致力(li)于(yu)解決批次不穩定(ding)、動物(wu)(wu)(wu)源污染、低(di)活(huo)性(xing)等行業痛點，提供無動物(wu)(wu)(wu)源、高純度和高活(huo)性(xing)的重組蛋白(bai)因子。上海曼(man)博生物(wu)(wu)(wu)是QKine在中國(guo)(guo)地(di)區的官(guan)方授權代(dai)理商(shang)。

曼博生物&Qkine重組細胞因子——讓細胞實驗的每一步，都更可控

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