截至目(mu)前，相關臨(lin)床試驗(yan)取得的進展(zhan)已(yi)證(zheng)明基于LV載(zai)體的細胞(bao)療法的有效(xiao)(xiao)性。提高靶細胞(bao)轉(zhuan)導效(xiao)(xiao)率和減少轉(zhuan)導LV載(zai)體量(liang)，是提高細胞(bao)治(zhi)療有效(xiao)(xiao)性、安全(quan)性和降(jiang)低(di)成本的重(zhong)要因素(su)。使(shi)用諸(zhu)如LentiBOOST GMP等級LV轉(zhuan)導增強劑是有效(xiao)(xiao)解(jie)決上(shang)述難題(ti)的一項可行方(fang)案。

LV載體(ti)的包膜糖(tang)蛋白類型(xing)(xing)(xing)及其特(te)異(yi)(yi)性同(tong)樣(yang)是(shi)影響轉導(dao)效率(lv)的因素之一。不(bu)同(tong)類型(xing)(xing)(xing)的包膜糖(tang)蛋白偽型(xing)(xing)(xing)LV載體(ti)通過與(yu)細(xi)(xi)胞(bao)膜表面的不(bu)同(tong)受體(ti)結(jie)合，促(cu)進病毒(du)黏附和入胞(bao)，增強不(bu)同(tong)靶細(xi)(xi)胞(bao)的病毒(du)轉導(dao)效率(lv)，而(er)特(te)異(yi)(yi)性的包膜糖(tang)蛋白對陽性表達特(te)異(yi)(yi)性蛋白的細(xi)(xi)胞(bao)類型(xing)(xing)(xing)的細(xi)(xi)胞(bao)轉導(dao)有積極意(yi)義。

以上(shang)兩種方案旨在優化LV轉導效(xiao)率，同時使靶(ba)基(ji)因在細胞內穩定表達。

本文將解讀特異(yi)性載體(ti)scFV-αEGFR VSV-G/scFV-αCD30 VSV-G和LentiBOOST GMP LV增強劑對細胞轉導的(de)積(ji)極意義。

下述研究中，作者對VSV-G包膜糖蛋白進行特異性抗原結合的基因修飾，并成功設計含有針對表面抗原EGFR或CD30的antibody-retargeted lentivirus載體，實現特異性載體與細胞膜之間的高親和力并延長粘附時間，以達到提高轉導效率的目的。

LV載體示意圖見下(xia)圖一：

圖一(yi)：Antibody-retargeted lentivirus載體設計

作者使用不(bu)同比例(li)的(de)(de)scFv-αEGFR-added lentiviral顆粒轉導EGFR+HEK293T細胞，以驗證scFv-αEGFR-added lentiviral的(de)(de)有效性并優化比例(li)。

當(dang)MOI為1時，分別用(yong)含不同比(bi)例wt-VSV-G（圖(tu)二）的培(pei)養基(ji)孵育HEK293T, (2*105 cells per well) 24h，更換新鮮培(pei)養基(ji)后(hou)繼續培(pei)養24h。當(dang)scFv-αEGFR-VSV-G的比(bi)例為33%時，對EGFR+HEK293T細胞的轉導效率為62.3%，約為100.% wt VSV-G轉導效率（24.1%）的2.5倍。但當(dang)scFv-αEGFR-VSV-G的比(bi)例為100.%時，則對EGFR+HEK293T的轉導沒有積極作用(yong)。

以上表明，適(shi)當比(bi)例(li)的scFv-αEGFR-VSV-G的LV顆粒(li)能夠(gou)有效感染EGFR+HEK293T細胞。

圖二（左）：不同比例的wt-lentivirus

圖三（右(you)）：不同比(bi)例的wt- lentivirus對(dui)HEK293T的轉導(dao)效率

為了驗證antibody-retargeted lentivirus載體的抗原特異性。作者同時使用(yong)100.% wt- VSV-G和33% scFV-αEGFR VSV-G轉(zhuan)導(dao)EGFR+ T47D和EGFR-ZR75細(xi)胞。33% scFV-αEGFR VSV-G對EGFR-ZR75轉(zhuan)導(dao)效率低于100.% wt- VSV-G，而對EGFR+ T47D的轉(zhuan)導(dao)作用(yong)高于100.% wt- VSV-G，且(qie)scFV-αEGFR VSV-G對EGFR+ T47D的轉(zhuan)導(dao)效果顯示出與EGFR+HEK293T同樣的趨(qu)勢(shi)（圖四）。

以上結果說(shuo)明antibody-retargeted lentivirus對表達特(te)異(yi)性抗原的(de)(de)靶細(xi)胞的(de)(de)病毒載體轉導表現出積(ji)極作用。

圖四：scFV-αEGFR VSV-G對EGFR+/EGFR-細胞轉(zhuan)導效(xiao)率的影響

基于上述研究，作者優化了CD30+ lymphoma cells的轉導方(fang)案(an)。分別使用(yong)100.% wt VSV-G、spinoculation、LentiBOOST、33% scFv-αCD30-VSV-G在不(bu)同條件下轉導KARPAS-299、SUP-M2和SUDHL-1。

在(zai)spinoculation條件下(xia)，100.% wt VSV-G和33% scFv-αCD30-VSV-G的(de)(de)對(dui)上述(shu)細胞的(de)(de)轉導(dao)(dao)效率(lv)均增(zeng)高；在(zai)spinoculation+LentiBOOST條件下(xia)，MOI為10時(shi)，33% scFv-αCD30-VSV-G 對(dui)KARPAS-299、SUP-M2和SUDHL-1的(de)(de)轉導(dao)(dao)效率(lv)增(zeng)加至(zhi)80%以上。將MOI從10降低(di)至(zhi)1時(shi)，33% scFv-αCD30-VSV-G對(dui)上述(shu)細胞的(de)(de)依(yi)舊維持較高的(de)(de)轉導(dao)(dao)效率(lv)（50%~60%）。

由此可見(jian)，spinoculation+LentiBOOST可在較低(di)的MOI條(tiao)件下(xia)維持理想的轉導效(xiao)率(lv)，減少病毒用量，降(jiang)低(di)成本。

此外(wai)，LentiBOOST可(ke)有效(xiao)促(cu)(cu)進100.% wt VSV-G的轉(zhuan)導(dao)(dao)，將KARPAS-299的轉(zhuan)導(dao)(dao)效(xiao)率從40%提升到80%，對SUP-M2和(he)SUDHL-1同(tong)樣有不同(tong)程(cheng)度的促(cu)(cu)轉(zhuan)導(dao)(dao)作用。

圖五：不同實驗條(tiao)件(jian)下scFv-αCD30-VSV-G的轉導效率

綜上所述(shu)，LentiBOOST和(he)特(te)異(yi)性的(de)antibody-retargeted lentivirus載體(ti)對LV轉導有積極(ji)作用(yong)。LentiBOOST GMP作為可用(yong)于臨床(chuang)研究的(de)LV轉導增強劑對靶細胞(bao)無毒性作用(yong)，在提高(gao)LV轉導效率的(de)同時將VCN值限(xian)定(ding)在安全(quan)范圍(wei)內(nei)。

文章中用到的(de)(de)LentiBOOST是德國(guo)Sirion Biotech開發的(de)(de)一(yi)種非(fei)離子性(xing)、無細胞(bao)毒性(xing)和(he)(he)非(fei)受體依賴性(xing)的(de)(de)Lentivirus轉(zhuan)導(dao)增強劑(ji)，賦(fu)予其與生物(wu)膜(mo)和(he)(he)疏水(shui)性(xing)顆粒相互作(zuo)用的(de)(de)能力，通過降低細胞(bao)膜(mo)粘稠度、提高脂質交(jiao)換和(he)(he)跨(kua)膜(mo)轉(zhuan)運，從(cong)而提高慢病毒轉(zhuan)導(dao)細胞(bao)的(de)(de)效率。

目(mu)前該產品在(zai)美國和歐(ou)洲(zhou)已(yi)有30多個(ge)藥(yao)物phase Ⅲ/Ⅱ/Ⅰ臨床實驗中，并有相關(guan)藥(yao)物已(yi)上(shang)市(shi)銷售，國內已(yi)有項目(mu)進入臨床Ⅱ期。