黑人巨粗进入疼哭A片,国精品人妻无码一区二区三区牛牛,丰满人妻熟妇乱偷人无码,熟妇高潮一区二区三区,国产精品第12页

1. Mirror, mirror on the wall, which is the best cell of them all?

如果您正在考慮將器官芯片 (OOC) 技術納入您的工作流程，您或您的團隊可能不知道從哪里開始。使用商用解決方案（例如CN-Bio的PhysioMimix OOC），可以輕松實現從 2D 或更簡單的 3D 類器官/球體檢測的過渡。如果您處于這個階段，您可能會發現CN-Bio的信息指南圖很(hen)有用。 

對于已經選擇了解決方案的人來說，您的下一個考慮因素是確保您生成的數據有意義。

這里簡化為5P：Prior , Planning , Pre-validation to ensure , Perfect assay , Performance.

在此階段，我們無論怎么強調選擇正確細胞的重要性都不為過。

2. 預驗(yan)證(zheng)原代人(ren)類細胞對(dui)于 OOC 的重(zhong)要性

并(bing)非(fei)所有細胞在(zai) OOC中都表現良好，也(ye)并(bing)非(fei)所有細胞類型都具有最高程度(du)的(de)人(ren)類相(xiang)關(guan)性！

圖1-不(bu)同來源捐贈者(zhe)的(de)肝微組織

由于 OOC（也稱為微生理系(xi)統 (MPS)）的(de)(de)目(mu)的(de)(de)是(shi)盡(jin)可(ke)能地重現(xian)人(ren)(ren)類生理學，因此我們有(you)目(mu)的(de)(de)地選(xuan)擇使(shi)用原代人(ren)(ren)類細(xi)(xi)胞(bao)，但是(shi)，即使(shi)您嚴(yan)格遵循解凍/接種方(fang)案，也不(bu)意味著(zhu)您的(de)(de)細(xi)(xi)胞(bao)在 3D OOC 培養中表現(xian)良好（圖(tu)1、圖(tu)2）。 

圖2-良好/較差的(de)肝(gan)臟微組織

在過去的五年里，CN-Bio測試了來自不同細胞供應商的 50 多個原代人肝細胞批次，其中超過 60% 未能達到我們可接受的性能標準，其中大多數甚至未能形成 3D 肝臟微組織。

我們計算出，確定兩名通過驗證程序的捐贈者大約需要花費 10-15,000 美元，并需要科學家花費 100 多個小時的時間，但這些時間花得值。

通過(guo)使用預先(xian)驗(yan)證(zheng)的細(xi)胞（如源自 LifeNetHealth LifeSciences 或 Lonza，被CN-Bio驗(yan)證(zheng)，隨附(fu)驗(yan)證(zheng)報告的細(xi)胞），您將從跨實驗(yan)的一(yi)致性和(he)增強的數據穩定(ding)性中獲益。

盡(jin)管我(wo)們鼓勵(li)客戶盡(jin)可(ke)(ke)能(neng)使用我(wo)們目(mu)錄中經(jing)過驗(yan)證的(de)(de)細胞，但我(wo)們了(le)解(jie)(jie)某些地理區域的(de)(de)進(jin)口限制(zhi)會影響這一點(dian)。此外(wai)，您可(ke)(ke)能(neng)希望從頭開始開發(fa)自(zi)己的(de)(de)模型，擁有替(ti)代解(jie)(jie)決方案，甚(shen)至可(ke)(ke)能(neng)是內部開發(fa)的(de)(de)平臺。那么，在進(jin)行(xing)自(zi)己的(de)(de)內部預驗(yan)證檢測時需要考慮什么？請繼續移步閱讀，來看美國FDA的(de)研究，如何開(kai)始自己內(nei)部的(de)預驗證研究。

3. 驗證培(pei)養3D細胞的(de)流程示例是(shi)什么樣(yang)的(de)？

CN-Bio已經開(kai)發了一(yi)個人體代謝紊亂疾病----非酒精性脂肪性肝炎（NASH）的(de)模型，使用了人肝細(xi)胞（PHHs）、肝星狀細(xi)胞（HSC）和庫普弗細(xi)胞（KCs）。讓我們(men)以此(ci)為例，為您介紹這三種細(xi)胞培養(yang)驗(yan)證過程(cheng)：

首先，您需要預(yu)先選擇(ze)5-10個PHH供體(ti)，并確定所需的(de)關鍵細胞健康和功(gong)能標(biao)志(zhi)(zhi)物(wu)，以(yi)比較每個供體(ti)的(de)表現，包(bao)括通過(guo)/失(shi)敗的(de)閾值。為了評估 3D 支(zhi)架上的(de)組織形成，我們還(huan)建(jian)議進行組織特異性的(de)免疫熒光染色(se)和隨后的(de)共聚焦(jiao)顯微(wei)鏡/分析，以(yi)從(cong)視覺方面確認您的(de)3D培養物(wu)的(de)質量。對于PHHs，我們隨后量化各種功(gong)能性生物(wu)標(biao)志(zhi)(zhi)物(wu)，包(bao)括LDH、尿素、白蛋白和CYP3A4。

為了確保肝組織培養的持久性，使用您的OOC平臺對選擇的所有PHH供體進行為期14天的培養。每2-3天收集培養基樣品，以監測細胞健康和功能，以評估供體培養是否在每個時間點保持在可接受范圍內或之外，并表現出持續的功能。通常會運行此過程兩次，以確保供體特性的可重復性。

以類似的方式，第二步涉及選擇幾個KCs供體，并測試它們對炎癥刺激的反應，例如脂多糖（LPS）。為了評估它們的反應，我們量化炎癥標志物，如白細胞介素-6（IL-6）和腫瘤壞死因子α（TNFα）。與一個或兩個成功驗證的PHH供體一起進行的共培養，為期14天，同時使用LPS作為KCs誘導劑。為了確保共培養細胞的性能保持在可接受范圍內，我們在不同的時間點評估PHH的健康和細胞功能，以及KCs的炎癥反應。

第三(san)步(bu)是獲取(qu)幾個HSC供體(ti)，與(yu)經過驗(yan)證(zheng)的(de)PHHs和(he)KCs一起進行(xing)共(gong)培(pei)養。建立一個三重培(pei)養實(shi)驗(yan)，測試多種PHHs、KCs和(he)HSCs的(de)組(zu)合，理想情況下創(chuang)建不同的(de)供體(ti)組(zu)合。在驗(yan)證(zheng)實(shi)驗(yan)期間，我們(men)使(shi)用CN-Bio的(de)高脂培(pei)養基（HEP-Fat）培(pei)養細(xi)胞以(yi)誘(you)導NASH表型。與(yu)之(zhi)前(qian)的(de)階段一樣，我們(men)將實(shi)驗(yan)培(pei)養14天，以(yi)確保培(pei)養的(de)持久性(xing)。然后選(xuan)擇HSC誘(you)導劑，如轉化生(sheng)長因子(zi)β（TGFβ），這些誘(you)導劑特異性(xing)激活HSCs。用這些誘(you)導劑處理細(xi)胞，以(yi)確定共(gong)培(pei)養在誘(you)導后是否產生(sheng)更高級(ji)的(de)纖維(wei)化表型。

選(xuan)擇的(de)終點測定與預定的(de)通過(guo)/失(shi)敗閾值(zhi)需要(yao)包括纖維連接蛋白、組織抑制金屬蛋白酶1（TIMP-1）等纖維化標志(zhi)物以及脂(zhi)肪和(he)HSC激活的(de)免疫(yi)熒(ying)光(guang)染色(se)。那些在14天內表現穩定（即符合(he)每種(zhong)細胞類型的(de)選(xuan)擇標準(zhun)限度）的(de)三細胞培養現在已經(jing)驗證可供使用(yong)。

雖然一旦您獲得經驗，驗證過程在程序中是合乎邏輯和簡單的，但程序中最關鍵的步驟是第一步。如前所述，大約60-70%的PHH供體無法在3D OOC環境中培養。當與良好的PHH供體一起培養時，其他細胞類型更有可能成功驗證并接種。在CN-Bio的實驗中，大約四分之一的三細胞培養組合失敗。

提前告訴您，您需要預算數萬（美）元，并考慮運行這樣的研究，需要四到六個月的測試期。然而，對于NASH，如果您愿意，也可以繞過這個過程！CN-Bio已將這一驗證原則應用于一款名為“NASH in-a-box”的獨特產品，該套件不僅提供了經過3D驗證的共培養原代細胞，還包括解凍培養基、肝小組織質控試劑盒、專有的誘導NASH細胞培養基、Multi-chip Liver-12+芯片培養板耗材以及細胞培養用的培養基/補充劑。

結合(he)軟件(jian)引導(dao)的(de)協議（可逐步(bu)引導(dao)您完(wan)成實驗過程），該套件(jian)簡化了(le)整個(ge)工(gong)作流程，使您能夠受益于CN-Bio十(shi)多年的(de)經驗。更重(zhong)要的(de)是(shi)(shi)，它們還為您提(ti)供(gong)了(le)一個(ge)選擇 ---- 是(shi)(shi)將寶貴的(de)時間用于做(zuo)出新的(de)發(fa)現，還是(shi)(shi)用于驗證(zheng)細(xi)胞(bao)！

【推薦閱(yue)讀】