傳統的蛋白質表達純化流程十分依賴人工操作,并且往往需要幾周甚至更久。無細胞蛋白表達的興起可將這一時間縮短至十幾個小時,但是仍需要現進行表達載體的制備,體外擴增和高通量蛋白表達然后再進行篩選等多步操作。Nuclera將這些復雜的流程集合到eProtein Discovery系統。該系統使用基于數字微流控的智能卡盒、無細胞蛋(dan)白質合(he)成和熒光蛋白檢測技術,使研究人員更容易大規模獲取高質量蛋白質。
只要將目標蛋白質(zhi)的(de)序(xu)列輸入配套(tao)軟件(jian),就可(ke)以(yi)(yi)利用預(yu)設融合(he)標簽(qian)定(ding)制DNA構建體(ti)(ti)以(yi)(yi)優化表(biao)(biao)達(da)(da),然(ran)后將表(biao)(biao)達(da)(da)載(zai)體(ti)(ti)裝載(zai)到機器上,該(gai)系(xi)統(tong)就會(hui)通過自動(dong)化構建篩(shai)選(可(ke)同時篩(shai)24種構建體(ti)(ti) x 8種無細胞混合(he)物(wu)(wu)=192種表(biao)(biao)達(da)(da)條件(jian)),在48小時內,根(gen)據(ju)(ju)可(ke)溶(rong)性、可(ke)純(chun)化性和純(chun)化產量數據(ju)(ju)確定(ding)最(zui).佳表(biao)(biao)達(da)(da)條件(jian),然(ran)后放大(da)規模并(bing)獲取(qu)蛋白質(zhi)以(yi)(yi)供下游應用。該(gai)工作流程僅(jin)需(xu)3步(bu),可(ke)生產18kDa~300kDa的(de)蛋白質(zhi),還更容易地篩(shai)選和獲取(qu)同源(yuan)物(wu)(wu)、直系(xi)同源(yuan)物(wu)(wu)、突變和異構體(ti)(ti)。
1. 設(she)計與(yu)準備:將蛋(dan)白質序列輸入(ru)軟件,利用預設(she)融合標簽設(she)計構建(jian)體,并使用eGene制(zhi)備試(shi)劑盒制(zhi)備表達(da)構建(jian)體。
2. 表(biao)達與(yu)純(chun)化(hua):自動化(hua)篩(shai)選192種表(biao)達條件以(yi)評(ping)估(gu)可(ke)溶性產量,再從其中選取30種進行strep-tag可(ke)純(chun)化(hua)性評(ping)估(gu),依據篩(shai)選數據確(que)定(ding)最.優eGene /無細胞(bao)混合(he)組合(he),整個過程快速效率高(gao),為后續研(yan)究奠定(ding)基礎。
3. 放大(da)與應用:基于篩選結果(guo)對蛋白質進(jin)行(xing)微克(ke)至(zhi)毫(hao)克(ke)級別的放大(da)生產,最終獲得高純度蛋白質,滿足不同(tong)實驗需求。
? 未知的藥物靶(ba)點
? 難以表達(da)的蛋白質
? AI/ML蛋白質工(gong)程
? 從頭設計蛋(dan)白(bai)質
? 可(ke)開發性評估
? 氨(an)基酸標(biao)記