發布時間：2025/03/20 點擊數：471 前言
TILs（Tumor Infiltrating Lymphocytes，腫(zhong)瘤(liu)浸潤淋(lin)巴(ba)(ba)細(xi)(xi)胞）是從(cong)(cong)腫(zhong)瘤(liu)組(zu)織(zhi)中(zhong)分離出的(de)(de)(de)浸潤淋(lin)巴(ba)(ba)細(xi)(xi)胞。TILs細(xi)(xi)胞療法(fa)是指(zhi)從(cong)(cong)腫(zhong)瘤(liu)組(zu)織(zhi)中(zhong)分離腫(zhong)瘤(liu)浸潤的(de)(de)(de)淋(lin)巴(ba)(ba)細(xi)(xi)胞，在體外(wai)培養和(he)大量(liang)擴增后回輸到病人體內的(de)(de)(de)療法(fa)。TILs細(xi)(xi)胞療法(fa)有力殺傷(shang)腫(zhong)瘤(liu)細(xi)(xi)胞的(de)(de)(de)關鍵在于從(cong)(cong)腫(zhong)瘤(liu)組(zu)織(zhi)中(zhong)獲(huo)得高活(huo)性、高質量(liang)的(de)(de)(de)TILs。
從腫瘤(liu)組(zu)織中(zhong)(zhong)分離TILs的(de)方法(fa)有機械分離法(fa)、酶(mei)消(xiao)化法(fa)等，膠(jiao)原酶(mei)是酶(mei)消(xiao)化法(fa)中(zhong)(zhong)常(chang)用的(de)蛋(dan)白酶(mei)。在本文(wen)中(zhong)(zhong)小編(bian)將向各位小伙伴介紹膠(jiao)原酶(mei)消(xiao)化法(fa)在TILs研究中(zhong)(zhong)的(de)應(ying)用，并推(tui)薦德國(guo)Nordmark制造(zao)的(de)可在臨床上應(ying)用的(de)GMP等級(ji)膠(jiao)原酶(mei)。
一(yi)、Nordmark 膠原酶簡(jian)介
Nordmark 提(ti)供從科研級(ji)到臨床應(ying)用(yong)的GMP級(ji)膠(jiao)(jiao)原(yuan)酶(mei)產品，NB6 GMP級(ji)在藥物(wu)研發和臨床試(shi)驗中(zhong)(zhong)得到廣fan應(ying)用(yong)，早在2009年，ChondroCelect成為歐洲shou個ATMP(Advanced Therapy Medicinal Products)藥物(wu)，而該(gai)產品中(zhong)(zhong)使用(yong)的膠(jiao)(jiao)原(yuan)酶(mei)正(zheng)是(shi)Nordmark的Collagenase NB 6 GMP Grade膠(jiao)(jiao)原(yuan)酶(mei)。目前已(yi)有(you)60+使用(yong)Nordmark膠(jiao)(jiao)原(yuan)酶(mei)的ATMP研究(jiu)項目已(yi)經在臨床階(jie)段(duan)，其中(zhong)(zhong)21項目是(shi)有(you)關TILs研究(jiu)。
二、應用案例
以(yi)頭頸癌為例(li)，向各位小伙伴分享膠原酶在TILs提取和分離中應(ying)用案例(li)。
1、獲取新(xin)鮮(xian)的頭頸癌手術(shu)切除(chu)組織；
2、用適量體積緩沖溶液清洗組織塊表面的血液等；
3、將(jiang)腫瘤組織(zhi)剪碎成1~2mm3的組織(zhi)塊(kuai)；
4、離心收集組織塊；
5、用(yong)適量體積緩沖溶液清洗剪碎(sui)的組織塊，重復3次；
6、用適量的膠原酶溶(rong)液（1mg/ml）重懸剪碎(sui)的組織塊；
7、37℃孵育30min；
8、添加足量預冷的緩沖溶液，混勻后離心并收集細胞；
9、用適量體積緩沖溶液(ye)重懸細(xi)胞，100μm過濾器(qi)過濾收集單細(xi)胞；
10、CD3、CD4、CD45等(deng)表(biao)面Marker染色；4℃孵育30min；
11、流(liu)式細胞(bao)儀分析、篩(shai)選，收集目標細胞(bao)；
12、TILs培養或凍存。
更多關于Nordmark膠原酶在TILs領域的應用請聯系上海曼博生物：
1、超過25年(nian)的高質量膠原(yuan)酶(mei)專業(ye)供應,按照制藥級標準(zhun)進行純化和(he)生產；
2、組(zu)織細(xi)(xi)胞解(jie)離的整體解(jie)決方案:按照不同種屬、組(zu)織/器官、細(xi)(xi)胞類(lei)型進行(xing)分類(lei)：
1) 不(bu)同規格，純度(du)，活性的膠原酶以及中性水解酶；
2) 從(cong)科研級(ji)到GMP等級(ji)以及無動物源級(ji)別多(duo)重選(xuan)擇(ze),相關GMP產品已在FDA備案DMF；
3) 滿足絕(jue)大(da)多數(shu)組(zu)織(zhi)/器官(guan)的單細胞解(jie)離(li)需求,包括提供敏感細胞解(jie)離(li)專用的溫和解(jie)離(li)酶方案(an)。
3、用戶使用友好(hao)提供優化過的細胞解離Protocol；
4、供配套的(de)膠(jiao)原酶(mei)殘留檢測方案敏感細胞(bao)解(jie)離(li)專用的(de)溫(wen)和解(jie)離(li)酶(mei)方案。
