在生(sheng)命科學研(yan)究和(he)藥物(wu)開發領域，高質(zhi)量(liang)的(de)原(yuan)(yuan)代肝細(xi)胞是研(yan)究肝臟生(sheng)理功能(neng)、藥物(wu)代謝和(he)毒性評估的(de)重要工具。體外(wai)培養肝細(xi)胞的(de)核心挑戰在于如(ru)何(he)獲得形(xing)態結構(gou)完整(zheng)且(qie)保持高代謝活(huo)性的(de)肝細(xi)胞。而膠原(yuan)(yuan)酶(mei)作為從肝臟組織中分離原(yuan)(yuan)代細(xi)胞的(de)關鍵酶(mei)制劑，其選擇直接影響細(xi)胞的(de)產量(liang)、活(huo)性和(he)功能(neng)完整(zheng)性。

一、原代肝細胞分離的應用意義

原代肝細胞保留了體內肝臟(zang)的大部分特性，能(neng)夠準確反(fan)映藥物(wu)代謝、毒(du)性反(fan)應和疾病機制，因此在(zai)以(yi)下領域具有不可替代的價(jia)值(zhi)：

?  藥物代謝和毒(du)性研究

?  肝(gan)病發(fa)病機制研(yan)究

?  生物人(ren)工(gong)肝支持系(xi)統開發(fa)

?  肝細胞移植治療

?  肝臟(zang)再生醫(yi)學研(yan)究(jiu)

二、不同肝細胞分離方法的比較

以下小編(bian)簡要匯總(zong)了部(bu)分常(chang)用(yong)的肝臟(zang)細胞提取的方(fang)法，并對以下方(fang)法的優勢和不足之處進行(xing)對比(bi)。

以下(xia)(xia)以大鼠(shu)肝(gan)臟(zang)為例向(xiang)大家簡(jian)要介紹肝(gan)臟(zang)細胞提取(qu)流程及選擇合適的膠原酶(mei)產品。一般情況下(xia)(xia)采(cai)用(yong)膠原酶(mei)灌(guan)注法來分離大鼠(shu)肝(gan)細胞。簡(jian)要步驟如下(xia)(xia)：

1、提前對灌洗液(ye)進行預(yu)熱(re)；

2、將小鼠麻醉，打開腹腔、暴(bao)露肝臟，包(bao)括門靜(jing)脈（PV）和下腔靜(jing)脈（IVC）；

3、在PV和(he)IVC下方(fang)放置(zhi)外科線，穿刺PV后(hou)結扎固(gu)定；

4、往PV內以4ml/min注入(ru)Hanks液(小鼠(shu)為例)后剪斷IVC，期間可(ke)夾閉或(huo)打開(kai)IVC有助于血(xue)液排除；

5、至少灌洗(xi)5min，直至肝(gan)臟完全變(bian)色；

6、往PV內輸注Hanks液+膠原酶（推薦使用Nordmark Collagenase NB7D/NB8）混合液以4ml/min的速度持續消化(以大鼠為例，動物體型越大，流速越快、膠原蛋白酶濃度越高)；

7、完成消化(hua)后去(qu)除膽囊(nang)和肝(gan)包膜，將肝(gan)臟實質部分放置在(zai)容器中并用2~8℃預(yu)冷的(de)Hanks液浸(jin)泡，轉移至生(sheng)物(wu)安全柜(ju)進行后續(xu)處理(li)。

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?  嚴格質控：每批次提供詳細的活性檢測報告，確保實驗可重復性

?  低內毒素：減少對細胞的非特異性刺激

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