注：我(wo)司為Polysciences官(guan)方(fang)授權中國總代理（申明(ming)日(ri)期：2024年1月1日(ri)）

一(yi)、產品介紹

Polysciences公司提(ti)(ti)供(gong)一系列PEI產品：研(yan)究(jiu)級產品PEI MAX和Transporter 5，以及(ji)cGMP級MAXgene GMP，提(ti)(ti)供(gong)適合于任(ren)何規模AAV、LV病毒載(zai)體和重組(zu)蛋白(bai)制造的成(cheng)本效益更(geng)高、供(gong)應可靠且更(geng)高質量的轉染試劑。

PEI MAX 是一款(kuan)高(gao)(gao)濃縮的(de)粉(fen)劑(ji)，多(duo)數科(ke)學(xue)家選(xuan)擇(ze)PEI MAX ，在(zai)內(nei)部自行制(zhi)備更(geng)(geng)低(di)成本、效益更(geng)(geng)高(gao)(gao)的(de)轉(zhuan)染(ran)試劑(ji)。多(duo)年以(yi)來，經過眾多(duo)業內(nei)人士(shi)評審的(de)公開研究(jiu)和出版文(wen)獻表明，在(zai)HEK293、CHO 和 Sf9系(xi)統中可獲得更(geng)(geng)高(gao)(gao)的(de)轉(zhuan)染(ran)效率，在(zai)重組抗體和病(bing)毒載體生產中穩(wen)定性更(geng)(geng)高(gao)(gao)，可靠性更(geng)(geng)強(qiang)。PEI MAX是一種非GMP等(deng)級轉(zhuan)染(ran)試劑(ji)，適用于基礎科(ke)學(xue)研究(jiu)及(ji)藥物研發(fa)早期(qi)階段。

PEI MAX 40K 是(shi)(shi)線性Polyethylenimine，PEI鹽(yan)酸(suan)鹽(yan)形式，是(shi)(shi)線性Polyethylenimine PEI 25K的升級產品。相比(bi)于PEI25K，PEI MAX 40K ：

· 水解形式（去乙酰化）；

· 鹽酸鹽形式，具更高的水溶特性；

· 含更長連續性片段，其質子化氮水平比PEI 25K提高11%以上。

Transporter 5轉染(ran)試劑是一種即用(yong)型線性(xing)PEI衍生物(wu)。由PEI MAX配置而成的即用(yong)型無菌試劑，采用(yong)0.1μm PES無菌過濾器，可消(xiao)除支(zhi)原(yuan)體污染(ran)風險。適用(yong)于工藝開(kai)發、臨(lin)床前和(he)早期臨(lin)床研(yan)究，助力(li)過渡(du)到MAXgene用(yong)于cGMP生產。

MAXgene GMP (cat# 26406/26435) 是(shi)一種cGMP轉(zhuan)染(ran)試劑，在Polysciences研究等(deng)級轉(zhuan)染(ran)試劑（PEI MAX 或 Transporter 5)的效率和(he)可擴(kuo)展性基(ji)礎上增(zeng)加(jia)了驗證(zheng)工藝和(he)監管流(liu)流(liu)程，適用于細胞和(he)基(ji)因(yin)治療(liao)病毒載體的研發和(he)生產。

二(er)、產品特點

Polysciences PEI轉染試劑優勢：

· 更高質量的R&D和cGMP等級產品；

· 更高轉染效率，更低細胞毒性；

· MAXgene符合cGMP標準和ISO13485質量管理體系；

· 經過驗證的生產工藝；

· 以“全合成”形式，無動物源成分；

· 更高性價比，適用于從早期研發到臨床及商業化生產的各個階段；

· 嚴格控制批間穩定性；

· 國內外已有多個項目進入臨床階段；

· 具備殘留檢測方法。

三、使用方法

PEI MAX粉末(mo)配(pei)置方(fang)法：

1) 將(jiang)1g PEI MAX 40K放入盛有900 mL水的玻璃燒杯(bei)中

2) 放(fang)入攪(jiao)拌(ban)(ban)轉子，放(fang)置于(yu)磁力攪(jiao)拌(ban)(ban)器上(shang)，設置攪(jiao)拌(ban)(ban)程序以形成一個較小的漩渦

3) 等(deng)待PEI MAX 40K溶解，通(tong)常需(xu)要5分鐘左右

4) 用25 mL塑料移(yi)液管加入(ru)1 N NaOH溶液滴定至pH 6.9~7.1

5) 如果(guo)不小心超過7.1，則使用1N的(de)鹽(yan)酸和新(xin)的(de)塑料移(yi)液管將(jiang)pH重新(xin)滴定至(zhi)6.9~7.1

6) 將溶液轉(zhuan)移(yi)到1L玻璃量筒中(zhong)，加入水定容至1L

7) 用無菌真空過(guo)濾(lv)(lv)膜過(guo)濾(lv)(lv)配(pei)制的轉染試劑溶液

8) 按需分裝(zhuang)，4°C儲存

注：未經配制的粉末有效期為2年。

配置成液體后分裝在(zai)(zai)合(he)適的(de)(de)瓶子中(zhong)，并且保存在(zai)(zai)4℃的(de)(de)轉(zhuan)染試劑將(jiang)可(ke)在(zai)(zai)6個月之內(nei)保持性能，如僅用(yong)于蛋白定(ding)性研究，分裝的(de)(de)轉(zhuan)染試劑可(ke)延(yan)長有(you)效使(shi)用(yong)期至1年。

四、經過馴化的無血清培養懸浮細胞轉染流程

1. 準備工作

轉染前2~3小(xiao)時(shi)，種植細胞密度(du)為 1X106/mL 于培養容器中。 

2. 轉染步驟

（以250 mL搖瓶為(wei)例，轉(zhuan)染前種植細胞(bao)總體(ti)(ti)積為(wei)25mL，最終總培養(yang)體(ti)(ti)積為(wei)50mL） ，準備PEI-DNA 轉(zhuan)染混合物（按照(zhao)以下操作順序）：

1) 在(zai)含有2.5mL（25mL 的 10%）稀釋(shi)液的 EP 管中加(jia)入50ug質(zhi)粒DNA（質(zhi)粒用量建議(yi)在(zai) 1~2ug/106細(xi)胞(bao)之間優(you)化，此(ci)處使用1ug/106細(xi)胞(bao)）

2) 輕(qing)輕(qing)地(di)混勻/振蕩(dang)溶液(ye) 

3) 在DNA溶液中加入50~200uL PEI轉染試劑（PEI/DNA 的比例建議在1~4：1之(zhi)間優化，初(chu)次(ci)推薦使用2：1或3：1） 

4) 渦(wo)旋振蕩5秒鐘 

5) 將管子靜(jing)置于(yu)超凈工(gong)作臺10~15分(fen)鐘(zhong)，使 PEI-DNA 復合(he)物形成（建議共(gong)孵育(yu)時間不超過(guo)20分(fen)鐘(zhong)） 

6) 用移(yi)液器(qi)輕輕上下吹打混合液3次 

注：邊晃動搖瓶，邊將PEI-DNA 混合液加入更換了培養基的轉染孔中，確保 PEI-DNA 復合物均勻分布，防止局部濃度過高。

3. 孵育培養 

將細胞培養瓶放入培養箱，搖瓶培養2~3小時后，加入25 mL新鮮培養基，繼續培養。 

通常，在(zai)轉染(ran)后(hou)36-48小時(shi)可(ke)檢測(ce)到重組蛋白表(biao)達或(huo)包裝的病(bing)毒顆粒。轉染(ran)后(hou)72-96小時(shi)可(ke)觀(guan)察到更大產量。

五、客戶體驗