發布時間：2023/11/27 點擊數：536 本(ben)文(wen)概(gai)況
來(lai)(lai)自 Imperial College London 的(de)研(yan)究團隊使用 CN-Bio的(de)器官芯片系統(tong)(tong)構建了一種能夠剖析乙肝病毒（HBV）全生(sheng)命(ming)周期的(de)系統(tong)(tong)。該(gai)系統(tong)(tong)可(ke)以(yi)維持至少40天，可(ke)以(yi)重現HBV生(sheng)命(ming)周期的(de)所有(you)步驟，包括患者(zhe)源HBV的(de)復制和(he)HBV 的(de)cccDNA，研(yan)究發(fa)現，感(gan)(gan)染(ran)HBV后的(de)先天免疫和(he)細(xi)(xi)胞(bao)因子反(fan)應(ying)與(yu)在HBV感(gan)(gan)染(ran)患者(zhe)中觀察到(dao)的(de)反(fan)應(ying)相似，因此可(ke)以(yi)分離對免疫逃避和(he)生(sheng)物標志物驗證重要的(de)途徑。此外，本研(yan)究還證明人原代肝細(xi)(xi)胞(bao)(PHH)與(yu)其他非實質細(xi)(xi)胞(bao)的(de)共培養能夠鑒定免疫效(xiao)應(ying)物的(de)細(xi)(xi)胞(bao)來(lai)(lai)源，從而為HBV研(yan)究提供了一個有(you)價(jia)值(zhi)的(de)臨(lin)床前平臺(tai)。
引言(yan)
乙(yi)型(xing)肝炎病(bing)(bing)毒（HBV）感染(ran)(ran)與(yu)肝硬化和肝癌的(de)(de)(de)(de)發(fa)展密切相關。目前臨床上控制(zhi)乙(yi)肝的(de)(de)(de)(de)藥物(wu)（如拉米夫定、恩替卡韋、替諾福韋）主(zhu)要(yao)是靶向 HBV 基因組子(zi)代(dai)病(bing)(bing)毒體內的(de)(de)(de)(de)逆轉(zhuan)錄(lu)前體核(he)酸（pgRNA），但這已經代(dai)表了乙(yi)肝感染(ran)(ran)的(de)(de)(de)(de)晚(wan)期(qi)，不會(hui)消除(chu) HBV 的(de)(de)(de)(de)雙(shuang)鏈 DNA（cccDNA）。HBV生(sheng)命周(zhou)期(qi)的(de)(de)(de)(de)研究一直很(hen)復雜，主(zhu)要(yao)是由于缺(que)乏合適的(de)(de)(de)(de)體外模型(xing)來概括肝細胞中(zhong)病(bing)(bing)毒生(sheng)命周(zhou)期(qi)的(de)(de)(de)(de)所有步(bu)驟，以(yi)及難以(yi)為HBV復制(zhi)建立生(sheng)理上完整的(de)(de)(de)(de)宿主(zhu)細胞模型(xing)。
肝細胞(bao)是 HBV 的(de)靶(ba)細胞(bao)，由(you)于(yu)肝臟是一個復(fu)雜的(de) 3D 結構，即使(shi)有原代(dai)肝細胞(bao)（PHH）作為疾病模(mo)型靜態培(pei)養(yang)，但(dan)它們也會在(zai)培(pei)養(yang)過(guo)程中快速去分化（形態改(gai)變、CYP450酶活(huo)性(xing)(xing)喪失(shi)等）。雖然目前(qian)的(de)一些(xie)改(gai)進型模(mo)型能顯示出HBV 感染的(de)某些(xie)方面，但(dan)局限性(xing)(xing)也非常明顯，具體有：
1.對(dui)患者來(lai)源(yuan)的(de)HBV病毒(du)不敏感，僅支持短暫(zan)的(de)低水(shui)平(ping)感染，或啟動感染需(xu)要非常(chang)高的(de)病毒(du)滴度（高MOI），且需(xu)要二甲基亞砜（DMSO）和聚乙二醇(chun)（PEG）以增強病毒(du)結合，或使(shi)用免(mian)疫(yi)調節劑，包(bao)括Janus活化激酶/信號(hao)轉導(dao)子和轉錄因
子激活子（STAT）抑制劑；
2.大多數利用HBV感染PHH培養模型(xing)的研究需要在培養長達15天后才(cai)能(neng)進行分析，此時大多數PHH已經去分化；
3.很(hen)少有系統可以研究(jiu)免(mian)疫反應和宿主/病原體(ti)間的相互作用(yong)，表(biao)達 HBV 的癌細胞(bao)系生理相關(guan)性很(hen)有限(xian)，人源化小鼠模型脆(cui)弱、實驗進(jin)展緩慢且成(cheng)本昂貴。
微生理(li)系統（MPS），通常被(bei)稱為(wei)“器官芯片”（organ-on-a-chip），已經成(cheng)為(wei)在臨床前藥物(wu)研(yan)究中(zhong)獲得相關人體(ti)數據的有前途(tu)的工(gong)具。它們旨在通過在3D支架中(zhong)培養細胞，并在灌流(liu)條件下(xia)模擬(ni)血液流(liu)動，來(lai)復制人體(ti)組織的結(jie)構和功能特性。
研究目標
在(zai)這里，我們描述(shu)一種新的(de)(de)(de)(de)(de)HBV 3D PHH 培(pei)(pei)養(yang)(yang)模型(xing)，與傳統的(de)(de)(de)(de)(de)靜態2D PHH培(pei)(pei)養(yang)(yang)物(wu)、SACC PHH（由(you)PHH和(he)(he)小鼠成纖維細(xi)胞(bao)系(xi)NIH3T3-J2組成）和(he)(he)3D肝球體相比，3D PHH 培(pei)(pei)養(yang)(yang)模型(xing)通過微流控培(pei)(pei)養(yang)(yang)（MPS），肝細(xi)胞(bao)能夠在(zai)更長的(de)(de)(de)(de)(de)時間內(nei)保持功能性(xing)，允許用患者來(lai)源的(de)(de)(de)(de)(de)HBV在(zai)低滴度情況下感染(ran)PHH。除(chu)了促進宿(su)主和(he)(he)病毒遺傳學的(de)(de)(de)(de)(de)研究外，該平臺還應該能夠使用PHH/Kupffer共培(pei)(pei)養(yang)(yang)物(wu)剖析復雜(za)的(de)(de)(de)(de)(de)宿(su)主/病原(yuan)體相互作用，并(bing)驗證HBV感染(ran)的(de)(de)(de)(de)(de)生(sheng)物(wu)標志物(wu)、治(zhi)療(liao)反應或潛在(zai)的(de)(de)(de)(de)(de)治(zhi)療(liao)干(gan)預。
結果與討論
1、3D PHH 長期培養形(xing)成生(sheng)理性肝微組織
為了(le)模擬肝竇上的PHH組織，我們使用微流(liu)控(kong)循(xun)環灌注(zhu)有膠原涂(tu)層的聚苯乙xi支架（圖 1），培(pei)(pei)(pei)養基以1μL/s的速度(du)再循(xun)環為培(pei)(pei)(pei)養物(wu)提供穩定(ding)水平(ping)的營(ying)養和氧氣，這是傳統二維（2D）PHH培(pei)(pei)(pei)養物(wu)的主要障礙之一。
圖1：微(wei)流控灌(guan)注(zhu)示(shi)意(yi)圖，其中(zhong)培(pei)養基通過氣(qi)動微(wei)泵(beng)再循環，放大圖為用(yong)于(yu)細(xi)胞粘附(fu)的膠(jiao)原涂層支架。每個板由12個這樣的孔(kong)組成，其中(zhong)培(pei)養液(ye)流速可(ke)調節。
幾(ji)種模型(xing)中(zhong)，3D PHH和(he)3D球(qiu)體培(pei)養物保持活力并表(biao)(biao)現(xian)出穩定(ding)的形態(tai)和(he)表(biao)(biao)型(xing)時(shi)間較(jiao)長，其中(zhong) 3D PHH至少40天，與傳統的靜態(tai)2D PHH培(pei)養物和(he)SACC PHH（由PHH和(he)小鼠成纖維細胞系NIH3T3-J2組成）相(xiang)比，后者在10-13天內表(biao)(biao)現(xian)出形態(tai)去分化，并且3D PHH 在培(pei)養2周后，與2D或SACC PHH相(xiang)比，產生(sheng)約10倍(bei)高水平(ping)的肝細胞特異性標志(zhi)物白蛋白（圖(tu)2）。
圖2：a:接(jie)種后(hou)3天(tian)在3D支架(jia)中接(jie)種后(hou)PHH的細(xi)胞活力。
b：3D PHH與3D球(qiu)體、靜(jing)態2D PHH和SACC PHH肝(gan)細胞(bao)形態的比(bi)較。
c:培(pei)養14天后，2D PHH、3D球體(ti)、SACC PHH和(he)3D PHH培(pei)養物(wu)中白蛋白（綠(lv)色）和(he)DAPI（藍色）的免疫熒光顯微圖。
d:通過ELISA定量培養14天(tian)后從2D PHH、3D球體(ti)、SACC PHH和3D PHH培養物中分(fen)泌白蛋白。
同時(shi)，3D PHH培(pei)養物中的(de)總白(bai)蛋白(bai)水平和每細胞白(bai)蛋白(bai)分泌動力學(xue)與(yu)3D球體(ti)培(pei)養物相(xiang)當，并隨(sui)著時(shi)間的(de)推移保(bao)持穩定（圖 3）。
圖3：不同(tong)肝細胞培養模型的(de)縱向白蛋(dan)白分泌。
為了進一步表征3D PHH培養物(wu)的(de)(de)代謝(xie)功能，我們比(bi)較了在(zai)2D、3D球(qiu)體、SACC PHH和(he)3D PHH中生(sheng)長的(de)(de)PHH中關鍵(jian)Cyp450的(de)(de)mRNA水平，包括I、II和(he)III期酶，總體而言(yan)，只有2D PHH 在(zai)培養2周后表現出較低(di)或(huo)不(bu)存在(zai)Cyp450基因水平，3D球(qiu)體和(he)3D PHH培養物(wu)顯示Cyp450水平與新鮮解凍(dong)的(de)(de)PHH相(xiang)當。(圖4)。
圖(tu)4：培養14天后,各模型(xing)及新鮮(xian)解凍的PHH和HepG2細(xi)胞(bao)的細(xi)胞(bao)色(se)素P450基因（HNMT、CYP2A6、SLC22A1、CYP2A13和GSTP1）mRNA表(biao)達比(bi)較。
為了(le)測(ce)試3D PHH的代(dai)謝活性(xing)(xing)，在(zai)培(pei)(pei)養7天(tian)后(hou)評估了(le)6 個不同肝細胞供體(ti)中(zhong)CYP3A的生物(wu)活性(xing)(xing)，并(bing)顯示出一致的CYP3A活性(xing)(xing)（圖 5a）。此外，在(zai)接種(zhong)PHH后(hou)7、14和21天(tian)，對(dui)CYP1A2、CYP2C9和CYP3A4代(dai)謝其各自底物(wu)的能力(li)進行(xing)了(le)評估，圖5b表明3D PHH的功(gong)能完整維持(chi)(chi)。DPPIV/CD26的穩定分泌，膽管的標記(ji)物(wu)和用(yong)5-CDF染色的培(pei)(pei)養物(wu)進一步(bu)證明肝膽管是功(gong)能性(xing)(xing)的并(bing)維持(chi)(chi)較(jiao)長時(shi)間。對(dui)在(zai)3D PHH培(pei)(pei)養中(zhong)生長了(le)20天(tian)的PHH進行(xing)超微結(jie)構分析，發現(xian)了(le)類似肝竇的結(jie)構特征，包括膽汁小管和緊密連接的形成（圖5c-f）。
圖5：a:3D PHH 6個(ge)肝細胞供體培(pei)養7天后(hou)的CYP3A活性。
b:3種代(dai)謝酶的代(dai)謝活性定量(liang)。
c:通過Luminex測(ce)定的3D PHH培(pei)養物中(zhong)膽管(guan)標記物DPPIV/CD26的穩(wen)定維持.
d:CDFDA染(ran)色(se)測(ce)定(ding)膽管功能。
e、f:培(pei)養20天后通過透射電子顯微鏡對3D PHH進行的超微結構分析(xi)。
（實心(xin)箭頭：膽(dan)管。空心(xin)箭頭：肝微絨(rong)毛。星號：緊密連接。L：脂滴）
2、3D PHH 易(yi)受(shou)長期HBV感(gan)染(ran)
為了評估3D PHH是否可(ke)以感(gan)(gan)(gan)染HBV，將3D PHH與患者來(lai)源的(de)(de)HBV以100GE/cell的(de)(de)MOI孵育，然后(hou)在(zai)感(gan)(gan)(gan)染后(hou)10天通過免(mian)疫熒光檢測HBcAg和(he)HBsAg，這表(biao)明大(da)多數細胞(bao)被感(gan)(gan)(gan)染， 且在(zai)相(xiang)同(tong)病(bing)毒(du)滴度下各模型(xing)對 HBV 的(de)(de)易感(gan)(gan)(gan)性也(ye)不同(tong)（圖6-a）。HBsAg和(he)HBV DNA的(de)(de)產生(sheng)在(zai)感(gan)(gan)(gan)染后(hou)至少22天內是穩定(ding)的(de)(de)（原文獻影片6）。
圖(tu)(tu)6：a: 使用(yong)患者源HBV（100GE/cell）感染(ran)3D PHH后(hou)10天，通(tong)過免疫(yi)熒光(guang)檢(jian)測左組圖(tu)(tu)：HBsAg和HBcAg，以及右(you)組圖(tu)(tu)：使用(yong)HepDE19衍生的蔗糖純化HBV（500GE/cell）感染(ran)后(hou)12天的3D PHH培養(yang)物(wu)，3D球形培養(yang)物(wu)和SACC PHH培養(yang)物(wu)中的HBcAg。
當使用如HBsAg和(he)HBV DNA的(de)(de)(de)分(fen)泌(mi)所(suo)證實(shi)的(de)(de)(de)低至0.05GE/cell 時(shi)，只有3D PHH培養基仍然(ran)容易被感(gan)(gan)染(ran)，同(tong)時(shi)對(dui)HBV感(gan)(gan)染(ran)的(de)(de)(de)啟動和(he)維持不(bu)需要使用PEG或DMSO，并且(qie)firstly證明在體外導致(zhi)穩定的(de)(de)(de)HBV感(gan)(gan)染(ran)的(de)(de)(de)MOI為0.05GE/cell低于定量限(xian)度（圖6-b、c）。
圖6：b: 通過檢測分泌的(de)HBV DNA，比較3D PHH培(pei)養(yang)物(wu)與3D球形培(pei)養(yang)物(wu)（左）和SACC PHH培(pei)養(yang)物(wu)（右）在感染HepDE19衍生(sheng)的(de)蔗糖純化HBV時的(de)敏感性。
c: 在3D PHH培養物(wu)感(gan)染蔗糖梯度(du)純化的(de)(de)HepDE19衍(yan)生HBV后，HBV DNA和HBsAg的(de)(de)縱向累積分泌(mi)。
從感染患(huan)者來(lai)源的(de)(de)HBV的(de)(de)3D PHH培養物中縱向釋放HBsAg和(he)HBV DNA導致病毒標志物和(he)復(fu)制(zhi)(zhi)中間體(ti)的(de)(de)穩定(ding)增(zeng)加(jia)（圖 7a-c）當用HBV逆(ni)轉錄(lu)酶(mei)（RT）抑(yi)制(zhi)(zhi)劑替諾福韋-阿拉非(fei)那酰胺（TAF）治療時(shi)，HBV DNA分泌迅速減少，而抗原表達保(bao)持穩定(ding)，這(zhe)表明與(yu)HBV感染患(huan)者類似，RT抑(yi)制(zhi)(zhi)劑是無效的(de)(de)(圖 7 d)。
圖7：肝細(xi)胞培養的HBV感(gan)染(ran)導致(zhi)HBV復制中間(jian)體的積累。
a：具有100GE/cell患者來源的HBV感(gan)染3D PHH第(di) 2 天和第(di) 10 天的 sgRNA和 pgRNA；
b-c:其他模型的(de)感染情況；d:在1μM替諾福韋-阿拉(la)非那酰胺(an)（TAF）治療3D PHH10天檢測(ce)HBeAg。
3、3D共(gong)培養中 Kupffer細胞的(de)功能性(xing)
研究表(biao)明，IL-6主要由巨噬細(xi)胞產生(sheng)，在(zai)(zai)抑制HBV轉錄活(huo)性方面發(fa)揮(hui)重要作用。然而，HBV感(gan)(gan)染的(de)(de)(de)(de)患(huan)者沒有(you)檢(jian)測到(dao)IL-6或TNF-α的(de)(de)(de)(de)表(biao)達。為了解決(jue)肝(gan)臟內非實質細(xi)胞群對(dui)HBV感(gan)(gan)染的(de)(de)(de)(de)影響，我(wo)們(men)進行了3D PHH和(he)原代Kupffer(KC)細(xi)胞的(de)(de)(de)(de)共培養(yang)(yang)(yang)。我(wo)們(men)使用PHH單一(yi)培養(yang)(yang)(yang)和(he)KC與PHH共同培養(yang)(yang)(yang)。為了評估KC的(de)(de)(de)(de)功能，我(wo)們(men)在(zai)(zai)接(jie)種后11天用1μg/mL脂多(duo)糖（LPS）刺激3D PHH和(he)3D PHH/KC共培養(yang)(yang)(yang)物(wu)，并在(zai)(zai)第12天分析(xi)IL-6和(he)TNF-α的(de)(de)(de)(de)蛋白(bai)質水平。正如預期(qi)的(de)(de)(de)(de)那樣，只有(you)共培養(yang)(yang)(yang)物(wu)分泌(mi)高(gao)水平的(de)(de)(de)(de)IL-6和(he)TNF-α，表(biao)明KC在(zai)(zai)整個培養(yang)(yang)(yang)期(qi)內保持功能（圖(tu)8a,b）。用100GE/cellHBV感(gan)(gan)染3D PHH和(he)3D共培養(yang)(yang)(yang)物(wu)會(hui)導致明顯的(de)(de)(de)(de)急性期(qi)反應，這一(yi)點(dian)僅在(zai)(zai)PHH/KC共培養(yang)(yang)(yang)物(wu)中表(biao)現為高(gao)水平的(de)(de)(de)(de)C反應蛋白(bai)（圖(tu)8-c），這已被證明是由巨噬細(xi)胞產生(sheng)的(de)(de)(de)(de)。
圖8：a、b: 3D PHH和3D PHH/KC共培養物對(dui)接種后11天添(tian)加的1μg/mL LPS的反(fan)應，通過刺激后24小時測量a IL-6和b TNF-α來確(que)定。
c:感染(ran)患者來源的HBV（100GE/cell）后KC引發(fa)的急性期(qi)反(fan)(fan)應(ying)(ying)，通過使(shi)用(yong)Luminex測量C反(fan)(fan)應(ying)(ying)蛋白來確(que)定。
緊接(jie)著，我(wo)們評估了(le)KCs是否(fou)仍(reng)對(dui)外源性刺激有(you)反(fan)(fan)應。3D PHH培(pei)養物本身對(dui)HBV感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)不產生任何(he)IL-6和(he)TNF-α，因(yin)為這(zhe)些(xie)(xie)細胞(bao)(bao)因(yin)子是KC特異性的(de)(de)（圖(tu)(tu)9a）。然(ran)而(er)，HBV感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)患者表(biao)(biao)(biao)現出IL-6和(he)TNF-α的(de)(de)血清水平升高，表(biao)(biao)(biao)明(ming)有(you)促(cu)炎免疫反(fan)(fan)應（圖(tu)(tu)9b，c）。對(dui)細胞(bao)(bao)因(yin)子和(he)趨(qu)化因(yin)子分(fen)(fen)(fen)泌的(de)(de)分(fen)(fen)(fen)析顯示(shi)，HBV感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)共培(pei)養物，類(lei)似于3D PHH單(dan)培(pei)養物，不會(hui)分(fen)(fen)(fen)泌IL-6和(he)TNF-α來應對(dui)HBV感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)（圖(tu)(tu)9d，e）。然(ran)而(er)，即使(shi)在感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)HBV后8天(tian)(tian)，當通過(guo)LPS施加外源性刺激時，KC也(ye)會(hui)迅(xun)速分(fen)(fen)(fen)泌IL-6和(he)TNF-α（圖(tu)(tu)9e）。有(you)趣的(de)(de)是，與未(wei)感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)培(pei)養物相比，感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)HBV的(de)(de)LPS誘(you)導的(de)(de)IL-6反(fan)(fan)應明(ming)顯更強(qiang)，這(zhe)表(biao)(biao)(biao)明(ming)即使(shi)HBV有(you)效地(di)阻斷了(le)PHH中的(de)(de)大多數先(xian)天(tian)(tian)免疫激活，它也(ye)不能(neng)破壞非實(shi)質細胞(bao)(bao)的(de)(de)外源性激活。此外，這(zhe)種LPS誘(you)導的(de)(de)先(xian)天(tian)(tian)免疫激活能(neng)夠通過(guo)減少HBsAg的(de)(de)分(fen)(fen)(fen)泌抑制HBV的(de)(de)復制（圖(tu)(tu)9f），而(er)這(zhe)并沒(mei)有(you)引(yin)起LPS誘(you)導的(de)(de)細胞(bao)(bao)毒性或IL-6誘(you)導的(de)(de)增(zeng)殖，如通過(guo)白(bai)蛋(dan)白(bai)分(fen)(fen)(fen)泌所示(shi)（圖(tu)(tu) 10），這(zhe)表(biao)(biao)(biao)明(ming)外源抗原可(ke)(ke)能(neng)參與引(yin)發對(dui)HBV感(gan)(gan)染(ran)(ran)(ran)的(de)(de)免疫反(fan)(fan)應。這(zhe)些(xie)(xie)證明(ming)了(le)3D PHH/KC共培(pei)養可(ke)(ke)以用來解(jie)析肝臟駐留細胞(bao)(bao)類(lei)型對(dui)HBV抗病(bing)毒反(fan)(fan)應的(de)(de)貢獻。
圖9：Kupffer細胞(bao)對HBV感染的反(fan)應需(xu)要外源信號。
a感(gan)染患者源性HBV（?）的3DPHH培(pei)養(yang)物中TNF-α和IL-6的縱(zong)向(xiang)分(fen)泌。
b、 c HBV感染(ran)患者(zhe)和(he)健(jian)康對照(zhao)者(zhe)血清(qing)b TNF-α和(he)c IL-6水平(ping)以及與(yu)血清(qing)HBsAg水平(ping)的相關性(xing)。
d–f感染患者源性HBV（100 GE/細胞）的(de)3D PHH培養物和(he)3D PHH/KC共培養物中d TNF-α和(he)e IL-6以及f HBsAg的(de)分泌。
感染后(hou)(hou)8天(tian)用1μg/mL LPS處理培養物(wu)，LPS刺激后(hou)(hou)24小時用Luminex定量(liang)TNF-α和IL-6水平，并在LPS刺激后(hou)(hou)48小時測定HBsAg分泌。所示數據為三個獨(du)立實驗的平均值±SD（*p＜0.05，***p＜0.001；Bonferroni后(hou)(hou)驗的雙向方差分析）
圖(tu) 10：在 3D PHH 和 3D PHH/KC 共培養物(wu)中(zhong)白蛋白的產(chan)生是穩定的。
HBV感(gan)染(ran)或1μg/mL LPS治(zhi)療不會影(ying)響感(gan)染(ran)后(hou)10天的(de)白(bai)蛋(dan)白(bai)分(fen)泌。顯示的(de)數據(ju)為(wei)三的(de)平(ping)均值±標準差獨立實(shi)驗。
結(jie)論(lun)
1.3D PHH模型能夠概(gai)括HBV生命周期(qi)的(de)所有步驟(zou)，包括患者(zhe)來源的(de)HBV的(de)復(fu)制和HBV cccDNA的(de)主要維(wei)持。
2.3D PHH模(mo)型(xing)感(gan)染HBV后的(de)先天(tian)免疫和細胞因子反(fan)應與在HBV感(gan)染患者中觀察到(dao)的(de)反(fan)應相(xiang)似(si)，因此可以分離對免疫逃(tao)避(bi)和生(sheng)物(wu)標志物(wu)驗證重(zhong)要的(de)途徑。
3.證明(ming)PHH與其他非實質細胞的(de)共培養能(neng)夠鑒定免(mian)疫效應(ying)物的(de)細胞來源，從而為HBV研究(jiu)提(ti)供了一個有價值的(de)臨(lin)床前(qian)平臺。
本文詳細的材(cai)料(liao)、研究方法、支持(chi)資料(liao)可參考文獻：
Ortega-Prieto, A.M., Skelton, J.K., Wai, S.N. et al. 3D microfluidic liver cultures as a physiological preclinical tool for hepatitis B virus infection. Nat Commun 9, 682 (2018). //doi.org/10.1038/s41467-018-02969-8
