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INI-822：針對HSD17B13，是(shi)一種(zhong)在慢性肝病中(zhong)基因驗證的(de)靶點，使用(yong)小分子抑(yi)制(zhi)劑在NASH模(mo)型中(zhong)的(de)研究(jiu)。

導讀

CN-bio的PhysioMimix NASH 測定用于為(wei)專注于發現和開發嚴重肝病(bing)療(liao)法(fa)的生物(wu)制藥(yao)公司Inipharm的主要候選藥(yao)物(wu)INI-822提供化合物(wu)功效(xiao)的人體相(xiang)關數據，其提(ti)交的內容是OOC供應商數(shu)據支持代謝(xie)性纖維化肝病藥物臨床(chuang)進(jin)展的起源(yuan)案例(li)。

引言(yan)

HSD17B13 是(shi)一種脂滴酶，其底(di)物(wu)(wu)(wu)包括生物(wu)(wu)(wu)活性脂質(zhi)。氧化脂質(zhi)是(shi)從多(duo)不飽和脂肪酸衍生出的(de)生物(wu)(wu)(wu)活性脂質(zhi)，它們(men)作為(wei)信號分子發揮作用，并已發現是(shi) HSD17B13 的(de)底(di)物(wu)(wu)(wu)之(zhi)一。

HSD17B13 的(de)非活躍等(deng)位基因與以(yi)下(xia)情況相關聯：

1、減少患非酒精性脂(zhi)肪性肝病（NASH）和肝硬化的風險[1]

2、減輕炎癥(zheng)和纖維化(hua)[2]

3、增加富含(han)多不(bu)飽和脂肪酸(suan)的(de)肝磷(lin)脂酰膽堿(jian)[3]

HSD17B13 與線粒體和內質網(wang)上的蛋白質發生相互作(zuo)用(yong)[4]。這些數據表明(ming) HSD17B13 在介導 NASH 和其他(ta)以肝細胞脂質積累為(wei)特征(zheng)的疾病中的生物活性脂質轉運中可能發揮作(zuo)用(yong)。

材料與方法(fa)

INI-822被用(yong)(yong)于評(ping)估(gu)對純化(hua)(hua)的(de)人(ren)類HSD17B13氧化(hua)(hua)多(duo)種底物(wu)的(de)抑制作用(yong)(yong)，通(tong)過定量產物(wu)形成來進行。通(tong)過對HSD17B家(jia)族成員的(de)生物(wu)化(hua)(hua)學測定和非(fei)靶標(biao)篩選(xuan)來確定選(xuan)擇性。在(zai)CN-Bio PhysioMimix微(wei)流控器官芯(xin)片系統的(de)LC-12（LOC）中(zhong)，準備(bei)了含有同源(yuan)性活(huo)性HSD17B13等位基因(yin)的(de)原代(dai)人(ren)類肝細(xi)胞、庫普弗細(xi)胞和星(xing)狀細(xi)胞的(de)三重共(gong)培(pei)養，在(zai)高脂(zhi)肪培(pei)養基中(zhong)加入或不加入INI-822。通(tong)過免疫組化(hua)(hua)學方法分析(xi)共(gong)培(pei)養中(zhong)的(de)纖維化(hua)(hua)。

INI-822在(zai)8到10周大(da)的Zucker肥胖大(da)鼠(shu)中口服(fu)給藥。在(zai)肝臟(zang)芯片(pian)的培養基和(he)Zucker肥胖大(da)鼠(shu)的血漿中，通(tong)過液相色譜(pu)(pu)/質譜(pu)(pu)法進(jin)行INI-822濃度、代謝組(zu)學(xue)（Biocrates）和(he)氧(yang)化脂質的脂質組(zu)學(xue)（West Coast Metabolomics Core/UC Davis）分析。

結果(guo)

1、INI-822具(ju)有(you)有(you)效性和選擇性，耐受性良好，適用于(yu)體外和體內測試。

INI-822以(yi)(yi)低nM級(ji)的(de)強度(du)(du)抑制HSD17B13。INI-822對(dui)其(qi)他HSD17B家族成員以(yi)(yi)及包(bao)括hERG在內的(de)安全性(xing)和(he)ADME靶(ba)點(dian)具(ju)有超過100倍的(de)選擇性(xing)。肝(gan)細胞的(de)穩定(ding)性(xing)支持在原代肝(gan)-芯片系統(tong)中進(jin)行(xing)測試。INI-822在小鼠、大鼠和(he)狗(gou)中的(de)清除(chu)率低，口(kou)服(fu)生物利(li)用度(du)(du)良好；建模(mo)支持適(shi)合每日口(kou)服(fu)劑(ji)量的(de)藥代動力學(xue)。兩種動物的(de)7天毒性(xing)學(xue)試驗(yan)已(yi)完成。

2、INI-822在原代人體肝-芯片系統中(zhong)減少(shao)了纖維蛋白蛋白質。

圖3. 在高脂(zhi)介質(zhi)中(zhong)進(jin)(jin)行(xing)(xing)為(wei)期20天(tian)的(de)肝(gan)(gan)芯(xin)片實驗，其(qi)中(zhong)第16天(tian)使用INI-822。空載(zai)對照組(zu)和INI-822組(zu)均保持(chi)高白(bai)蛋(dan)白(bai)水(shui)(shui)平(ping)，與保留(liu)的(de)肝(gan)(gan)特性(xing)一(yi)致，并且未導致LDH釋放增加。25μM的(de)INI-822表(biao)現(xian)出超過(guo)40%的(de)纖(xian)維蛋(dan)白(bai)蛋(dan)白(bai)質(zhi)減少。在后續研究中(zhong)，1μM和5μM的(de)INI-822較大降(jiang)低ɑSMA和膠原蛋(dan)白(bai)1的(de)水(shui)(shui)平(ping)（兩者均p < 0.0001）。INI-822在抗(kang)纖(xian)維化條件下的(de)游(you)離(li)分(fen)數(shu)低數(shu)為(wei)45nM。該研究在三次重復中(zhong)進(jin)(jin)行(xing)(xing)了兩次，對纖(xian)維蛋(dan)白(bai)蛋(dan)白(bai)質(zhi)水(shui)(shui)平(ping)進(jin)(jin)行(xing)(xing)了200次個體評估。

圖4. 在(zai)(zai)高脂(zhi)介(jie)質中(zhong)顯示的(de)培(pei)養基代謝組學(xue)隨(sui)時間演變的(de)演化。第20天的(de)介(jie)質代謝組學(xue)顯示了(le)PLA2的(de)產(chan)物/底物減(jian)少，個(ge)體甘油三酯(zhi)減(jian)少，并呈現個(ge)體磷脂(zhi)酰膽堿增加的(de)趨勢。該研(yan)究在(zai)(zai)三次重復中(zhong)進行了(le)兩次。#p<0.05

3、INI-822急性增加(jia)自(zi)由底(di)物(wu)，并在經過3周的投藥后在Zucker肥胖大(da)鼠中(zhong)增加(jia)了酯(zhi)化底(di)物(wu)。

4、INI-822在高脂高膽固醇飲(yin)食的 Zucker 肥胖(pang)大鼠中進行3周給藥(yao)后改變生物活性脂質。

圖5.INI-822口服給藥(yao)增加(jia) Zucker 大鼠中酯(zhi)化(hua)(hua)池中的(de)(de)生物(wu)(wu)(wu)活性(xing)氧(yang)脂質(zhi)底物(wu)(wu)(wu)。急(ji)性(xing)階段，自(zi)(zi)由狀態的(de)(de)多個已知(zhi)(zhi)底物(wu)(wu)(wu)上升(sheng)，但在(zai)3周的(de)(de)給藥(yao)后(hou)(hou)，酯(zhi)化(hua)(hua)的(de)(de)12-HETE和酯(zhi)化(hua)(hua)底物(wu)(wu)(wu)上升(sheng)，而自(zi)(zi)由狀態的(de)(de)底物(wu)(wu)(wu)相對于(yu)接受慣(guan)用(yong)治(zhi)療的(de)(de)大鼠的(de)(de)血漿減少。未顯示的(de)(de)數據：INI-822對三酰甘油的(de)(de)影響無變化(hua)(hua)。主(zhu)成分(fen)分(fen)析確定了對INI-822有響應的(de)(de)一(yi)個主(zhu)成分(fen)（PC）。層次聚類分(fen)析確定了6個生物(wu)(wu)(wu)活性(xing)脂質(zhi)簇，它們在(zai)INI-822的(de)(de)作(zuo)用(yong)下(xia)聚在(zai)一(yi)起。其中，Cluster 4 包含已知(zhi)(zhi)的(de)(de) HSD17B13 底物(wu)(wu)(wu)，在(zai)INI-822給藥(yao)后(hou)(hou)較大增加(jia)，主(zhu)要由總的(de)(de)（酯(zhi)化(hua)(hua)+自(zi)(zi)由）氧(yang)脂質(zhi)組成。

結(jie)論(lun)

1、基(ji)于INI-822的藥物(wu)樣性質和在(zai)人體基(ji)礎(chu)系統中(zhong)改善纖維蛋(dan)白蛋(dan)白水平，INI-822已被選定為藥物(wu)開發(fa)候選者(zhe)。

2、INI-822在原代人體肝器官芯片中降(jiang)低了纖維(wei)蛋白(bai)蛋白(bai)水平。

3、INI-822導致了在LoC系統(tong)中(zhong)介質代謝組的(de)變化，其中(zhong)甘油三酯減少(shao)，磷脂增(zeng)加。

4、INI-822對HSD17B13底(di)物和產物的(de)體(ti)內評估(gu)證實，INI-822抑制后底(di)物水平初期增加的(de)是游離氧脂(zhi)(zhi)質(zhi)，隨后是酯化的(de)氧脂(zhi)(zhi)質(zhi)。

5、HSD17B13抑制3周后導致酯化(hua)生物活性脂質總(zong)體(ti)增加(jia)，表明在藥物作用下(xia)生物活性脂質被封存。

參考(kao)文(wen)獻

1.Abul-HusnNS, et al. A Protein-Truncating HSD17B13 Variant and Protection from Chronic Liver Disease. NEJM 2018; 378:1096-1106.

2.Ma Y,et al. Handelman SK. 17-Beta Hydroxysteroid dehydrogenase 13Is a hepatic retinol dehydrogenase associated with histological features of nonalcoholic fatty liver disease. Hepatology 2019; 69: 1504-1519.

3.Qadriet al. Heterogeneity of phosphatidylcholine metabolism in non-alcoholic fatty liver disease, J Hepatol 2022;77:S111

4.Luck et al. A reference map of the human binary protein interactome Nature. 2020 April ; 580(7803): 402–408. doi:10.1038/s41586-020-2188-x