PEI MAX轉染試劑 MW40000(PEI 40K)

PEI MAX - Transfection Grade Linear Polyethylenimine Hydrochloride (MW 40,000)

產品簡介

PEI MAX——高產工業化轉染試劑-高度濃縮，可制備大量轉染試劑

Polysciences轉染試劑系列是基于聚乙烯亞胺（Polyethylenimine，PEI）的產品，因其較高的轉染效果，已應用于工業化生產。聚乙烯亞胺是一種具有較高的陽離子電荷密度的有機大分子，每相隔二個碳原子，即每“第三個原子都是質子化的氨基氮原子，使得聚合物網絡在任何pH下都能充當有效的“質子海綿”(proton sponge)體。PEI可用作轉染試劑，它可以縮聚DNA分子形成顆粒并轉染真核細胞。

PEI MAX 40K是由Polysciences出品的全合成線性聚乙烯亞胺瞬時轉染試劑。PEI MAX是一款高度濃縮的粉劑，大量科學家選擇PEI MAX ，在內部自行制備低成本、效益高的PEI轉染試劑。多年以來，經過眾多業內人士評審的公開研究和出版文獻表明，在HEK293、CHO 和 Sf9系統中可獲得很高的轉染效率，在重組抗體和病毒載體生產中穩定性高，可靠性強。PEI MAX 提供從96孔板到200L生物反應器持續的高基因表達細胞體系，實現從新藥研發到工業化生產的輕松過度。而且與大多數細胞轉染方案相比，使用PEI MAX 至少可降低40%轉染成本（部分案例可降低90%轉染成本）。

產品特點

PEI MAX 40K是線性聚乙烯亞胺鹽酸鹽形式（Linear Polyethylenimine Hydrochloride），是線性化聚乙烯亞胺PEI 25K的升級產品。相比于PEI 25K，PEI MAX 40K ：

1.完全水解（去乙酰化）；

2.鹽酸鹽形式，具更高的水溶特性；

3.含更長連續性乙烯亞胺片段，其質子化氮水平比PEI 25K提高11%以上。

應用領域

PEI MAX40K（cat#24765）是一款非GMP等級的PEI轉染試劑，適用于基礎學術研究和藥物研發早期階段，以固體粉末形式提供，需用戶自行配置（詳情見使用方法）。

客戶體驗

Expression of mAb B72-3, 8 days post-transfection using Gibco Freestyle F17 cell culture media . For more information, see the following publication: Delafosse, L., Xu, P. & Durocher, Y. Comparative study of  polyethylenimines for transient gene expression in mammalian HEK293 and CHO cells. Journal of Biotechnology 227,103–111 (2016). 

PEI MAX粉末配置方法：

1)將1g PEI MAX 40K放入盛有900 mL水的玻璃(li)燒杯中；

2)放入攪拌轉子，放置于磁(ci)力攪拌器上，設置攪拌程序以形成一個較(jiao)小的漩(xuan)渦；

3)等待PEI MAX 40K完全溶解，通常需(xu)要5分鐘左(zuo)右；

4)用25 mL塑料移液管加(jia)入1 N氫氧化鈉滴定至(zhi)pH 6.9~7.1；

5)如果不小心超(chao)過7.1，則(ze)使用1N的鹽酸和新的塑料移液(ye)管將pH重新滴定(ding)至6.9~7.1；

6)將溶液(ye)轉移到1L玻璃(li)量筒中(zhong)，加入水定(ding)容至1L；

7)用無(wu)菌真空過(guo)濾膜(mo)過(guo)濾配制的(de)轉(zhuan)染試劑溶(rong)液(ye)；

8)按需分裝，4°C儲存（切記不可冷凍）；

注(zhu)：未經配(pei)制的粉(fen)末有(you)效(xiao)期為2年。

配置成(cheng)液體后(hou)分裝在合(he)適的瓶子中(zhong)，并(bing)且(qie)保存(cun)在4℃的轉染試劑將可在6個月之內保持性能。

如僅(jin)用于蛋白定性(xing)研究，分裝的轉染試(shi)劑可延長有效使用期至(zhi)1年(nian)。

經過馴化的無血清培養懸浮細胞轉染流程

1.準備工作

 轉染(ran)前 2~3 小時，種植細胞密度為 1X10⁶ /mL 于培養容器中。

2. 轉染步驟（以 250mL 搖瓶為(wei)例，轉(zhuan)染前(qian)種植細胞(bao)總(zong)體(ti)積為(wei) 25mL，最終總(zong)培養體(ti)積為(wei) 50mL）

準備 PEI-DNA 轉染混合物（以下操(cao)作(zuo)順序(xu)尤為關鍵）。

1)在含有2.5mL（25mL的10%）稀釋液的聚丙烯EP管中加入 50ug 質粒 DNA（質粒用量建議在 1~2ug/10⁶ 細胞之間優化，此處使用 2ug/10⁶ 細胞）；

2) 輕輕地(di)混勻/振蕩(dang)溶液；

3) 在(zai) DNA 溶(rong)液(ye)中加入 50~200uL PEI 轉(zhuan)染試劑（PEI/DNA 的比例(li)建議在(zai) 1~4：1之間優化，首次推薦使用(yong) 2：1 或 3：1）；

4) 渦旋振(zhen)蕩 5 秒(miao)鐘；

5) 將管子靜置于超凈工作臺 10~15 分鐘，使 PEI-DNA 復合物形成（共孵育時間建議不超過 20 分鐘）；

6) 用移液(ye)器輕輕上下吹打混合液(ye) 3 次；

注：邊晃動搖瓶，邊將 PEI-DNA 混(hun)合(he)液加(jia)入更換了(le)培養基的(de)轉(zhuan)染孔(kong)中，確保 PEI-DNA 復(fu)合(he)物(wu)均勻分布，防止局部濃度過高。

3. 孵育培養

將細胞培養瓶放入培養箱，搖瓶培養 2~3 小時后，加入25mL新鮮培養基，繼續培養。

通常，在轉染后36-48小時可檢測到重組蛋白表達或包裝的病毒顆粒。轉染后72-96小時可觀察到最大產量。

含血清(qing)培養的(de)貼壁細胞轉染(ran)流程

1. 準備工作

? 轉染前18~24小時細胞鋪板。

? 在培養基中加入合適數量的細胞，以確保在轉染前形成 60~80%匯合度的單細胞層，此為最理想的細胞轉染密度。

2. 轉染步驟（以 6 孔板單孔舉例）

? 轉染前 1~2 小時，將需要轉染的孔中的培養基替換成 3mL 新鮮的含有2%低血清或無血清的培養基。（高濃度血清抑制(zhi)PEI的(de)性能，大(da)多數情(qing)況下，較(jiao)(jiao)低的(de)血清含量(≤ 5%)或無血清將獲(huo)得較(jiao)(jiao)高的(de)轉染效率(lv)）。

? 準備 PEI-DNA 轉染混合物（以(yi)下操(cao)作順序尤為(wei)關鍵）。

1) 在含有300uL（3mL的10%）稀釋液的聚丙烯 EP 管中加入2ug質粒 DNA；

2) 輕輕地混勻/振蕩溶液；

3) 在 DNA 溶液中加入 2~8 uL PEI 轉染試劑（PEI-DNA 的比例建議在 1~4：1 之間優化，首次推薦使用 2：1 或 3：1）；

4) 渦旋振蕩 5 秒鐘；

5) 將管子靜置于超凈工作臺 10~15 分鐘，使 PEI-DNA 復合物形成（建議共孵育時間不超過 20 分鐘）；

6) 用移液器輕輕上下吹打混合液 3 次

? 邊晃動(dong)細胞培(pei)養板(ban)，邊將 PEI-DNA 混合液(ye)加入更(geng)換了(le)培(pei)養基的轉染孔(kong)中，確保 PEI-DNA 復(fu)合物均勻分布，防止局部(bu)濃(nong)度過高(gao)。

3. 孵育培養

  ? 將細胞培養板放入培養箱培養 18~24（請注意，此處并非常規lipo脂質體轉染的 4 小時后換液）小時后，更換含有血清的正常培養基；

  ? 通常，在轉染后 36-48 小時可檢測到重組蛋白表達或包裝的病毒顆粒，轉染后 72-96 小時可觀察到最大產量。